不简单的生化检验！！！

风云

生化检验是医学检验重要的一部分，其特点是定量检测。是否使用了先进的仪器设备、合格的试剂、有资质的人员就能做好生化项目检验？多数情况下是肯定的，但实际工作中还会出现这样那样的失控，甚至不得其解。这需要我们多总结遇到的问题，研究项目的原理，做工作中的有心人，才能不断提高检验水平。

生化检验是医学检验重要的一部分，其特点是定量检测。是否使用了先进的仪器设备、合格的试剂、有资质的人员就能做好生化项目检验？多数情况下是肯定的，但实际工作中还会出现这样那样的失控，甚至不得其解。这需要我们多总结遇到的问题，研究项目的原理，做工作中的有心人，才能不断提高检验水平。

一、标本及时分离与测定

标本的及时分离及测定是体现样本真实结果的重要保证。利用NADH转化为NAD 变化率来检测其物质含量的试验都或多或少受到血液存放时间的影响。原因是全血存放时间越长，红细胞利用血清中的糖进行无氧酵解产生丙酮酸，丙酮酸使NADH转化为NAD ，这样使测定结果假性升高，如ALT、AST、BUN、CK、LDH、HBDH等。此外，由于糖酵解，血中GLU随着存放时间的延长约以5-7%/小时的速度降低。因此，一定要作好与临床的沟通，对抽血和标本运送人员进行培训；收到标本后及时分离血清并检测；也可将全自动生化分析仪上的延迟时间设置大于60秒，这样试剂在延迟期内消除丙酮酸的干扰，可完全避免假阳性结果的出现。

二、抗凝剂的使用

目前临床上常用的抗凝剂有EDTA-2K、肝素、枸盐酸钠等，TBA和AFU不能用肝素抗凝剂，因为肝素会使TBA和AFU试剂发生混浊，导至吸光度假性偏高，从而使检测结果偏高。所以认真参阅试剂说明书，按照要求采集正确标本。

三、仪器用水

合格的仪器用水是保证生化结果的一个重要环节。测定离子类的项目：比如铜、铁、锌、钙、镁、磷，在使用过程中，仪器用水的质量相当重要，虽然现在一般医院的生化仪都带有制水系统，但制水系统基本都是制备去离子水，离子交换树脂在使用一段时间后交换能力明显下降，需要定期进行更换，否则制备的水离子含量多，电导率偏高。使用含离子超标的水冲洗仪器，直接影响检验结果。再如血氨、二氧化碳项目，如果水质不好，仪器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，则检测该项目的结果也会受到严重的影响。如果血清中含有GLDH，而仪器用水存在氨时，可消耗NADH，使利用NADH的酶联连续监测法结果偏高。所以需要定期监测水质，当仪器用水的电阻小于1．0MΩ时要及时更换离子交换树脂或活性炭。

四、交叉污染

在使用全自动生化分析仪的过程中，可能会遇到这样的情况：单独做某个项目时结果没有问题，可是将它与某些项目组合在一起时，结果却出现异常。这种现象首先就要考虑交叉污染。交叉污染是在生化分析仪中比较常见的现象，其中的原因是全自动生化分析仪的清洗系统随着仪器使用时间的累加，清洗效果逐渐下降，试剂交叉污染的程度增加所致。全自动生化分析仪各试剂间的相互干扰影响到了检验结果的准确性和可靠性，给检验结果带来很大的偏差。只要我们找出其中的规律，就可以避免这种情况的发生。以下两种情况较为多见：

（1） 生化分析仪清洗问题造成的交叉污染

生化分析仪的交叉污染主要来源于：样品针、试剂针、搅拌棒和比色杯。由于全自动生化分析仪试剂针需要接触各种试剂，一般难以彻底清洗干净，所以容易造成分析项目的携带污染．而生化项目的测定往往仅需要几微升样本，试剂往往需要几百微升，尤其在没有自动冲洗程序的流动池式生化分析仪上，由于前带现象的存在，如果前一个样本为高值样本，则接后的第一个低值标本结果应慎重报告。不仅没有冲洗程序的生化分析仪器上有这种现象，就是具有自动冲洗程序的全自动生化分析仪也有交叉污染。

另一个值得注意的问题是许多生化仪器由于长期频繁的利用，加样针和试剂针的注射器磨损加重、注射器的“特氟龙”吸头不及时更换等原因，使吸样针或试剂针密封层增大，产生泄漏现象也是造成样本间及试剂间相互污染的一个重要原因。试剂吸样或样品吸样不准确，通常导至利用速率法测试的标本系统偏低或偏高。速率法计算因子是由加样体积和试剂体积参与确定的，如果加样体积或加试剂体积不准，导至真正速率计算因子和理论计算因子偏离，从而使检测结果不准确。此外，还有搅拌棒涂层出现破损、比色杯磨损或冲洗泵故障等引起的结果偏差。为避免上述交叉污染出现，需按照要求定期进行仪器维护保养，及时更换零部件，并定期对仪器进行校准。

（2）检验项目间的交叉污染

一个项目会影响紧随其后项目的测试结果，造成这种影响的原因是前者试剂中含有后者试验的测定物质而直接干扰其测试结果；或者前者试剂中含有改变后者试验反应条件或影响其反应进程的物质而间接干扰其测试结果。例如，在TP试剂中含有大量的CuSO4，如果将Cu放在TP项目的后面检测，会使检测结果偏高或重复性差。P放在含有磷酸盐的项目后面，TBA放在含有胆酸盐的项目后面，如CH，都会使检测结果偏高或重复性差。GLU放在CK和CK-MB的项目后面可能会使检测结果偏高或重复性差。原因是CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）试剂中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反应过程，因此可能对Glu测定带来干扰，尤其对Glu的HK法测定可能带来严重干扰。此外，相邻两个项目的PH值相差太大或对PH要求严格的项目，也会对测定的结果产生影响，比如TP和Alb之间PH相差较大，会互相干扰，TBA放在Alb后面测定，会使测定结果偏低。大多数酶反应pH值在6.0-7.5之间；ALP、γ-GT、LDH须在碱性条件下最适宜。解决此类交叉污染，需要了解项目试剂组成、反应的原理、所需的条件，来调整合适的实验顺序；在造成污染的项目和受污染的项目之间设置加强清洗。

五、试剂使用

（1）正确设置参数

生化分析仪上通常有分析程序供用户设定，包括样品量、试剂量、波长、分析方式和延迟时间、测试时间等。下面就延迟时间和加样程序的设定来说明如何正确使用分析参数。以肌酐苦味酸测定法为例，苦味酸在碱性条件下50秒前首先快速与如乙酰乙酸等快反应物质产生红色化合物，而在120秒后碱性苦味酸又能与慢反应物质产生阳性干扰，所以延迟时间最好设定为50～60秒之间，测定时间小于6O秒，这样就充分消除了快反应和慢反应干扰，从而检测到真正肌酐含量。此外，试剂说明书中关于参数的设置是经过厂家验证合理有效的，但仍需根据本实验室条件、仪器状态和样本结果进行综合观察，可以做适当调整以达到适合本实验室的检测要求。   

（2）校准液的使用  

目前生产厂家提供的校准液只适用于某一特定的分析系统，同一项目不同方法学的校准液不能混用，比如胆红素钒酸盐法用重氮法的校准液校准，TBA循环酶法用比色法校准液校准等都会造成测定结果不准确。甚至同一方法学，不同厂家的校准品和试剂都会有所差异。所以建议选择适合自已实验室的校准品，与理论计算的factor值差异不大，没有发现有明显的影响因素，如有条件可进行系统溯源。在实现溯源性目标过程中，以患者新鲜标本为实验对象，以方法学对比试验为验证手段。

（3）开瓶稳定性

开瓶稳定性也是检验试剂质量是否过硬的一个指标。目前就某些项目的方法学来讲，还达不到人们所要求的试剂开瓶后在仪器内放很长时间不需要定标，比如ALP、TP、GSP等PH为碱性的试剂，开瓶后试剂会吸收空气中的二氧化碳，使试剂本身的PH值下降，如果长时间开瓶不定标或校准，会使检测结果发生偏离，有些实验室为了方便，很长时间都不作校准，导至测定结果的不准确。所以上机试剂量要根据本实验室的标本量来定，放置1～2天的用量即可，试剂瓶在仪器内使用时间不要过长，及时更换。根据试剂特性，及时对项目进行校准。   

（4）不同批号试剂相混

将不同批号的试剂混合在一起使用的现象在工作中经常发生，但是由于不同批号的试剂生产时间不同，试剂中工具酶的活性会有差异，会发生水解的底物浓度随时间长短也会不同。因此混在一起使用而又不定标，可能会导至检测结果的不准确。还有如果有的试剂开瓶时间太长，空气中的灰尘或细菌会进入瓶中，由于有的试剂含有大量的蛋白质和盐，是细菌生长的最好条件，虽然有的试剂添加了防腐剂，但防腐剂的防腐也是有一定限度的，而且绝大多数厂家的试剂中是没有防腐剂的。所以建议不同批号试剂不要混用，如果混用最好重新定标；多个试剂瓶剩余不同批号的试剂，可以留起来待一定数量后混在一起，然后重新定标后使用。

来源：检验医界网