开展凝血检测对临床疾病的诊断具有重要意义,除了对出血疾病的筛查与诊断外,还用于血栓前状态的检查,所以保证实验结果准确性至关重要,现介绍如下:
1. 标本的采集
1.1 采集血标本前,要让病人处于空腹和平静状态,情绪激动,剧烈运动和神经紧张都会引起血小板增多,血小板,凝血和纤溶活性的增强。
1.2 采血时,止血带不应扎得太紧或时间太长,因长时间结扎会使因子Ⅷ和组织纤溶酶源激活剂(t-PA)释放和活化。
1.3 要用一次性塑料注射器和塑料试管,以减少血小板和凝血因子的活化,进针要顺利,第一支注射器采血2ml应弃去再换另一支注射器取实验用血,这样可以避免混入组织液,血液与抗凝剂要充分混匀;否则影响凝血检测的准确性。
2. 标本的储存和运输
2.1 标本采集后打入塑料或硅化的试管内,并且立刻塞紧盖子,否则会有CO2挥发,PH增高,影响APTT,PT延长。
2.2 要及早分离血浆,最好在2h内分离出来,对于当前不能做的标本,可将血浆分离分装在带塞子的塑料管内,冷冻在-20℃的冰箱内,对需要存放较长时间的标本 冰冻存于-80℃的冰箱内,冰冻的血浆融化时不能静置于室温中逐渐融化,这样会有纤维蛋白遇冷沉淀蛋白析出,应放在37℃水浴中轻轻摇动,使其迅速溶化。
2.3 标本需要在室温下运送,必须室温运送,因低温会损伤血小板,活化因子Ⅶ和因子Ⅺ,使PT,APTT结果缩短。必需低温的标本要在4℃以下运送,以防止因子Ⅴ和因子Ⅱ降解。
3. 试剂的选择
3.1 抗凝剂 要用抗凝剂为0.109mol/L的柠檬酸钠,它能有效地阻止因子Ⅴ和Ⅷ的活化,严格按1:9的比例抗凝,当HCT>55%或<25%时,应 按如下公式重新核算抗凝剂的用量,抗凝剂量(ml)=0.00185全血量(ml)×[100-HCT(%)]:不应使用变质的枸橼酸盐溶液,否则会使 PT、APTT试验结果偏低。
3.2 检测试剂 按照仪器的性能选用仪器配套的试剂,进口仪器,选用进口配套试剂,否则结果不准确,复溶的试剂,最好是现用现配,否则复溶后放置时间越长,越容易影响结果的准确性,暂时不用的复溶试剂要及时放在冰箱内冷藏。
3.3 仪器设备 仪器状态的好坏,直接影响实验的结果,所以全自动凝血仪要放在避光,透风的室内,并且要保证室内温度控制在25℃左右,开机前要做好准备工作,检查仪器的各个部件,看是否异常,作好每天的保养和维护,确保仪器的正常运行。
4. 操作技术
要严格按照操作规程操作,熟练掌握实验原理和步骤,做到熟能生巧,精益求精。
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