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发表于 2020-1-9 10:15
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核酸纯化柱的选择专题2:核酸纯化柱不同层(膜厚度)洗脱效率的比较;交流咨询QQ:1492876083
核酸纯化柱的选择专题2:核酸纯化柱不同层(膜厚度)洗脱效率的比较;交流咨询QQ:1492876083
本测试方法:
通过质粒提取试剂盒测试不同厚度的硅胶膜,用50,100,150微升洗脱测定洗脱效率
实验室设计
1:选择实际层数为2,3,4,5,6,7,8,9,10层(1mm厚,相当于市场厚度的一倍,市场大多是0.5mm厚膜,可自行拆解观察厚度,不同公司厚度不一样)
2:先用50微升体积洗脱测定一次浓度;然后将样品补充50微升洗脱缓冲液,将其从新加入核酸纯化柱洗脱测定浓度;第二次补充50微升洗脱缓冲液,将150微升缓冲液加入到核酸纯化柱再次洗脱测定浓度,测试硅胶膜的洗脱效率。
3:起始浓度的菌液选取3mL测试(不同收集浓度的菌产量有差别,后面我们将进行测试)
4:选择含PUC19质粒的DH5A菌作为提取对象。
实验材料:
含PUC19质粒DH5A菌株,分光光度计 。
实验方法
按照艾比根质粒小量提取试剂盒提取过夜培养的菌液,测定浓度。
实验结果数据分析:
PUC19质粒提取原始测量浓度数据:
膜层数
洗脱
体积
货号
260/280
260/230
Conc. (Ng/ul)
2层
50ul
P2-50/500/5000
1.98
2.23
333.1
3层
50ul
P3-50/500/5000
2.03
2.25
260.1
4层
50ul
P4-50/500/5000
2.02
2.24
266.7
5层
50ul
P5-50/500/5000
2.01
2.2
251.9
6层
50ul
P6-50/500/5000
2.02
2.26
267.1
7层
50ul
P7-50/500/5000
2.02
2.24
268.5
8层
50ul
P8-50/500/5000
1.98
2.19
290
9层
50ul
P9-50/500/5000
2.0
2.21
272.3
10层
50ul
P10-50/500/5000
1.98
2.18
289.4
2层
100ul
P2-50/500/5000
2.09
2.24
163.5
3层
100ul
P3-50/500/5000
2.07
2.2
155.9
4层
100ul
P4-50/500/5000
2.1
2.23
166.1
5层
100ul
P5-50/500/5000
2.08
2.21
165.8
6层
100ul
P6-50/500/5000
2.1
2.24
161.7
7层
100ul
P7-50/500/5000
2.1
2.24
177.8
8层
100ul
P8-50/500/5000
2.07
2.2
177.3
9层
100ul
P9-50/500/5000
2.08
2.21
176.3
10层
100ul
P10-50/500/5000
2.08
2.22
182.5
2层
150ul
P2-50/500/5000
2.1
2.18
117.4
3层
150ul
P3-50/500/5000
2.11
2.21
111.7
4层
150ul
P4-50/500/5000
2.12
2.24
114.2
5层
150ul
P5-50/500/5000
2.12
2.25
116.3
6层
150ul
P6-50/500/5000
2.14
2.26
112
7层
150ul
P7-50/500/5000
2.12
2.23
123.1
8层
150ul
P8-50/500/5000
2.13
2.27
119.9
9层
150ul
P9-50/500/5000
2.15
2.28
122.9
10层
150ul
P10-50/500/5000
2.11
2.25
130.3
图1 膜厚度和洗脱体积比较
洗脱体积(图1)
平均浓度(ng/ul))
备注
50ul洗脱
250
3ml菌液测试
100ul洗脱
150
3ml菌液测试
150ul洗脱
100
3ml菌液测试
洗脱体积
总产量
备注
50ul洗脱
12
3ml菌液测试
100ul洗脱
16
3ml菌液测试
150ul洗脱
18
3ml菌液测试
洗脱体积
洗脱效率
备注
50ul洗脱
75%
3ml菌液测试
100ul洗脱
95%
3ml菌液测试
150ul洗脱
相对比较,假设100%
3ml菌液测试
结果分析及建议:
对于需要50ul洗脱体积的建议选择P2-P5厚度的膜,可以满足高浓度要求。
对于洗脱体积大于50建议选择p6-10的膜,产量增加。
其它厚度的刻自行研究测试。
不同菌液和质粒提取含量有所差别,具体选择生产企业可自行测试。
50ul洗脱效率大致75%,100ul洗脱效率大致95%。建议洗脱体积控制50-100ul左右,可增加洗脱效率。
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