关于实验室管理的问与答

检验之星

一．标准操作程序的编写

(一)、SOP的含义是什么？

答：SOP是标准操作程序的英文缩写（Standard Operation Program）。

(二)、SOP文件应包括哪些主要内容？

答：SOP文件分为不同的类型，在内容上也有所不同，对某一个检测项目的SOP应包括以下内容：实验原理或检验目的；样品的种类及采集的要求；使用的试剂；使用的仪器；操作步骤；质量控制程序；结果解释及临床价值；方法的局限性；参考文献；如是使用设备的SOP应包括：操作的原理和组成；使用的目的和范围；仪器的校正程序；检测标准的操作步骤；质量控制程序；设备的功能；软件设置；操作过程；注意事项；设备的保养和维护；故障及排除等。

二．作业指导书

(一)、何谓作业指导书？

答：作业指导书是工作时的规程或规范类的文件，如对某一检验方法、校正程序、仪器设备维护过程，可用于直接指导操作人员进行各种质量控制活动时的执行性文件。

(二)、微生物学实验室的作业指导书主要有哪些内容?

答：主要有不同类细菌鉴定操作规程;细菌纸片法药敏试验操作规程;细菌对抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)测定的操作规程;细菌鉴定和药敏试验室内质量控制的程序;染色方法的操作规程;培养基制作的操作规程;所用每一种设备的操作规程等。

(三)、如何设计作业指导书的格式?

答：临床微生物作业指导书中的一项试验应成为一个独立的程序，至少应有页眉，页眉应标明指导书的编写者，负责人、编写日期、仪器或试验的名称;正文内容应包括试验或仪器的工作目的;操作的内容、步骤、方法、结果判断、结果解释；质量控制的要求；操作注意事项；流程；参考文献（应用标准的来源、版本）。

(四)、作业指导书多长时间更新较为合理?更新的程序?

答：作业指导书应随时更新对临床有误导的试验,建议3-5年作一次大的调整编制。作业指导书的更改不能由某一操作者任意改动,首先应由临床医生或操作者提出更改或取消该试验的理由，或由于目前的方法引起结果误差的实例，实验室主任与相关人员定期对存在的问题进行讨论，决定某一试验或方法是否继续采用或用新的替代方法。

(五)、作业指导书和SOP文件有什么区别?

答：作业指导书是一种规范类的执行性的文件,指导操作人员进行各种业务活动。从功能上讲SOP文件与作业指导书有非常多的相似性，但SOP文件需要按一定的要求、内容、格式、标准进行编写，SOP文件的编写的内容更具操作性和实用性。如关于检验项目操作程序ISO15189：或ISO17025 文件的相关部分对检验规程的编写均有一定的要求，而且要求其内容必须与当前的检验方法和操作步骤完全相一致。

(六)、如何编写细菌鉴定的SOP文件?

答：细菌鉴定的SOP可以按细菌类别为基础，写出每一类细菌鉴定的程序和主要鉴定试验的SOP文件，包括细菌鉴定的染色反应、初步鉴定试验如触酶试验、氧化酶试验等，鉴定细菌的主要生化反应、血清学反应、动物试验直到鉴定完成。如按不同的样品类型作为主干线编写，在编写上述内容前应包括细菌分离程序的SOP文件。

(七)、如何编写痰及下呼吸道样品分离鉴定的SOP文件？

答：应包括以下内容：?概况：正常人体的下呼吸道是无菌的,上呼吸道有正常菌群栖居。下呼吸道的分泌物在经上呼吸道排出时,常受口腔正常菌群污染。当病人出现咳嗽、咳痰、呼吸困难、咯血等症状时应采样检查，采集抗生素使用前样品。检样首先作显微镜检查，细菌培养。对分离的病原体应尽力鉴定到种并按CLSI抗微生物药敏试验标准操作，为医生选择抗生素提供参考。?检验材料与设备:要标明该材料来源如抗酸染色液：购自生物梅里埃诊断产品（上海）有限公司。要列出材料、设备的名称和来源。?样品检验步骤：从样品的采集、前处理、接种分离、初步鉴定、种的鉴定、药敏试验以及检验结果报告方式均应按规范编写，提供给操作者遵循。?临床意义：判断痰培养分离的细菌是致病菌或条件致病菌十分重要，某些国家的指南提示：在涂片和培养见到同样的细菌并有细胞吞嗜现象或细菌涂片中每一油镜视野菌数大于20个或占所有细菌的50%以上的优势菌有最大可能是致病菌。类似的提示应在SOP文件中体现。?操作注意事项：采集样品以清晨为佳，为减少口腔正常菌群污染样品，采集前应先用漱口液充分漱口，并漱口后立即留痰；样品采集后应立即送检，以防某些细菌在外环境中死亡。做结核分枝杆菌和真菌培养的样品不能及时送检时，放4C保存，以免杂菌生长等。?痰液及下呼吸道分泌物样品细菌检验操作流程图：略。?参考文献

(八)、如何编写细菌对药物的敏感试验的SOP文件？

答：对于细菌药敏试验的SOP文件的编写应包括纸片扩散方法和最低抑菌浓度（MIC）测定；每一种方法都应包括常规药敏试验药物种类的选择;试验原理;药敏试验的指征;该方法适用的范围;所需要的材料和设备;不同类细菌的药敏方法和步骤和用培养基的差异;质量控制的方法;培养基的配制及用途;标准比浊管的配制;目前使用标准的版本及参考文献等。

(九)、常用培养基或染色液质量鉴定文件应包括哪些内容？

答；无论是商品购买或自制的实验材料，都应有质量鉴定的过程。质量鉴定的文件内容应包括该项目的概述、适用范围、所需的材料、操作步骤、结果解释、报告方式和参考文献等。几乎包括全部日常所用的材料，如革兰染色液或抗酸染色液质量控制程序，染色液质控品使用程序；各种培养基质量鉴定操作程序等。

(十)、培养基的质量鉴定操作规程应包含哪些内容？

答：以血琼脂为例， 1.概述：阐明血琼脂的运用目的、质控方法、结果判断。2.适用范围，3.材料，4.检测方法，5.结果解释，6.报告方式，7.参考文献。通过对其一般性状（厚度、硬度、PH值、表面平整度、湿度）的判别和无菌试验；通过金葡菌、肺炎链球菌、溶血链球菌标准株在血平板上生长情况的观察，判断血琼脂培养基质量是否合格。

(十一)、临床微生物室应用设备的SOP文件应包括哪些项目？项目书写应包含的内容?

答：临床微生物室的设备的SOP文件应包括所有的设备，如分析天平、显微镜、麦氏标准管、冰箱、普通培养箱、高压蒸汽灭菌锅、二氧化碳培养箱、生物安全柜、自动、半自动或全自动细菌鉴定系统等。由于不同的设备功能和使用范围不同书写的项目会稍有不同，但总的内容基本相同。每一个文件中应包括该设备的产品名称、型号；原理及检测范围；参数的设置及标准；开机与关机程序；操作程序；设备的保养和维护；常见故障的处理；基本技术性能；运行环境要求（电源、温度、湿度、场地大小等）；操作流程图等。

一．室内质量控制

（一）、质控菌株

1．在标准菌株的来源中，英文缩写ATCC和NCTC代表什么？

答：ATCC代表美国典型菌株保藏中心；NCTC代表英国国家典型菌株保藏中心。

2．作为质控菌株应具备什么特征？

答：作为质控菌株首要的条件是能敏感的反应质量差异的，如反映营养培养基质量的质控菌株，一定是对营养要求高，不容易生长的苛养菌株；如作为药敏试验的质控菌株，对抗生素最具敏感；如测定最低抑菌浓度，那么结果应最处于折点附近的；对于测试生化试验培养基的质控菌株，应具备稳定的生物特征，反应终点明显的特征。

3．常规微生物学实验室药物敏感试验质量控制应使用哪些标准菌株？

答：常规纸片法药敏试验的质量控制菌株：ATCC 25922 大肠埃希菌、ATCC25923 金黄色葡萄球菌、ATCC 27853 铜绿假单孢菌、ATCC 29212 粪肠球菌、ATCC 35218 大肠埃希菌、ATCC 49247 流感嗜血杆菌、ATCC 49766流感嗜血杆菌、ATCC 49226 淋病奈瑟菌、ATCC 49619 肺炎链球菌。最低抑菌浓度（MIC）测定的标准菌株：ATCC 29213 金黄色葡萄球菌、ATCC 29212 粪肠球菌、ATCC 27853 铜绿假单孢菌、ATCC 25922大肠埃希菌、ATCC 49247 流感嗜血杆菌、ATCC 49766流感嗜血杆菌、ATCC 49226 淋病奈瑟菌、ATCC 49619 肺炎链球菌。

4． 测试5%羊血琼脂和巧克力琼脂平板质量应选择什么标准菌株？

答：评估培养基质量应执行我国卫生部行业标准（WS232/T－2002）测试5%羊血琼脂质量应选择金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）、化脓性链球菌（ATCC 19615），肺炎链球菌（ATCC 6305）、奇异变形杆菌（ATCC 12453），经24h培养可见到有的菌生长，有的部分抑制以及溶血现象。如化脓性链球菌呈小的、β溶血的菌落。巧克力琼脂可选择流感嗜血杆菌，经35°C 24h培养生长良好

5． 对伊红美兰、麦康凯和沙门志贺氏琼脂（SS）如何选择标准菌株？合格的指标是什么？

答：伊红美兰培养基要选择大肠埃希菌（ATCC 25922）、鼠伤寒沙门菌（ATCC 14028）和粪肠球菌（ATCC 29212），经24h培养，大肠埃希菌呈兰黑色菌落；鼠伤寒沙门菌呈无色菌落；粪肠球菌部分抑制。麦康凯琼脂可选择大肠埃希菌（ATCC 25922）、鼠伤寒沙门菌（ATCC 14028）、粪肠球菌（ATCC 29212）和奇异变形杆菌（ATCC 12453）。经24h培养，大肠埃希菌呈粉红色菌落；奇异变形杆菌和鼠伤寒沙门菌呈无色菌落；粪肠球菌部分被抑制。测试SS琼脂可采用鼠伤寒沙门菌（ATCC 14028）、粪肠球菌（ATCC 29212）、大肠埃希菌（ATCC 25922）、福氏志贺菌（ATCC 12022）。经24h培养，鼠伤寒沙门菌呈无色菌落，有或无黑心；福氏志贺菌生长，呈无色菌落；大肠埃希菌被部分抑制，呈粉红色菌落；粪肠球菌被完全抑制。

6．怎样选择生化反应质控菌株？

答：作为生化反应的质控菌株，每一个生化反应都应选择2株菌株，其中一株是阴性反应，一株阳性反应。菌株应对生化反应非常稳定，最好用标准菌株。

7．微生物学实验室应准备哪些标准菌株用于生化反应培养基的质控？

答：大肠埃希菌、迟缓爱德华菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌、雷极普鲁威登斯菌。上述菌株可对靛基质、甲基红、伏谱、枸缘酸盐利用、氨基酸分解、硫化氢产生、苯丙氨酸脱氨酶、尿素酶、葡萄糖产气等

（二）、室内质控监测项目

1．如何做染色液的质量控制？

答：微生物学实验室主要的染色液有革兰染色和抗酸染色。在每次新配制或新购入时必须做质控，并记录日期；革兰染色液应在每天染色前用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌同步染色。抗酸染色每周用非典型分支杆菌同步测试1次。为了生物安全也可将细菌制备成浓菌悬液高压灭菌后冰箱保存作为染色的质控菌株。金黄色葡萄球菌染成革兰阳性（紫色），大肠埃希菌染成阴性（红色），背景无沉渣和其他细菌或真菌污染。非典型分支杆菌应染成抗酸阳性（红色）。

2．如何保证高压灭菌器的灭菌效果？

答：高压灭菌器的灭菌效果应随物品作每次测试。可采用3M公司的变色胶条，另外每月至少有一次，用嗜热脂肪芽孢杆菌测试其灭菌的效果，并作好记录。

3．如何保证培养箱、冰箱和CO2培养箱的正常运转？

答：实验室要制定严格的质量控制制度，分工包干，专项专人负责，每天工作开始第一个开培养箱、冰箱和CO2培养箱的工作人员和下班前最后离开的工作人员要负责记录培养箱、冰箱和CO2培养箱的温度和CO2的含量,及时发现问题和故障,及时处理,使对工作质量的影响减低到最小。

4．分离培养基如何进行质量控制？

答：干粉培养基要根据有效期的长短酌量购入，新购入时必须用相应标准菌株测试并记录。干燥培养基应在质控记录中提示开始使用的日期，以便在发生质量差异时寻找原因。新倾注的平皿或新购入商品平皿应进行无菌试验，用相应的标准菌株验证培养基的分离能力。如验证血琼脂应选择肺炎链球菌、b-溶血链球菌，如验证巧克力琼脂应选择流感嗜血杆菌。相应功能的测试后必须作详细记录。

5．氧化酶、触酶试剂如何进行质量控制？

答：氧化酶和触酶是日常工作中使用频率最高的试剂，规定每天使用前必须用用大肠埃希菌和铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌和链球菌的标准菌株分别对氧化酶和触酶试剂进行测试。

6．诊断血清如何进行质量控制？

答：诊断血清是微生物学实验室必须常备但使用频率不高的诊断用品。买来时应与老的血清比较。使用后每季度应用已知菌株作质控。平时应注意观察血清是否被污染。为生物安全，可将质量控制用的菌株配制为浓菌悬液经高压后冰箱保存备用。

7．如何进行纸片药物敏感试验的质量控制？

答：药物敏感试验的质量控制活动可分为初始30天的每天测试的质控、每周1-2次的常规质控和连续5天的纠控程序。初始30天质控目的是测试实验室条件的稳定性，当在30天质控中有连续3次失控，说明实验室的条件不够稳定，还需每天继续做质控，直到质控过程全部合格或失控小于3次方可改为每周1次的常规质量控制程序。如果常规质控活动中，一旦失控1次，应查找原因并进入5天纠控测试。5天纠控中无失控时可改为每周1次否则应每日测试。

8．如何能使室内质量控制不间断地认真的进行？

答：首先应提高实验室每个工作人员的质量控制的意识，同时要有组织保证措施，把质量控制作为岗位工作的一部分，每一岗位都有相应的质量控制的任务，而不是把质量控制工作堆积给某一个人。实验室负责人定期监督检查质控活动中发现存在的问题和解决的措施，并实行奖惩制度。

9．是否每个微生物学实验室必须参加室间质量评价活动？

答：有条件建立微生物学实验室的医院均应积极参加地区、省市级或全国有关机构组织的室间质量评价活动，因为它是对你实验室质量的客观评价，可以帮助你发现实验室的系统误差。当你发现室内质控结果好但参加室间质量评价活动时与质控中心预想结果有规律地出现偏差，这是实验室系统误差的表现，你应竭力找出原因并设法解决，使你的实验室前进一大步，而这种系统误差在室内质量控制中是发现不了的。

10．每一个微生物学实验室参加多少个系统的室间质量评价活动比较合理？

答：目前对于这个问题没有文件规定，各实验室可根据自己的潜力决定。但对二级或二级以下的实验室，建议至少应参加本地区的室间质评活动，有条件的单位应参加省或全国的质评活动。就三级甲等医院而言，除了参加本省市和全国的质评活动外，有条件的实验室还可争取参加国际性的室间质评活动，以持续提高实验室的检测能力、扩大视野，拓宽思路