液体活检-

长长的路

说到血液，你会想起什么？

医院！

（小编最怕去的地方除了鬼屋就是医院）

血常规检查、各种生化检查啊

还有很多专项检测可以招呼

想了解健康更多

你的血液可以把你卖个底朝天。

如果不缺money，

来个全基因组的测序，

连你老祖宗是哪的都能挖出来。。。

现在，如果告诉你，通过血液还能检测肿瘤，你是更鸡冻还是更鸡冻呢？

没错！这阵风已经刮了不短时间了，你怎能不知它——肿瘤液体活检!

肿瘤液体活检

医生想要了解肿瘤，可以扫描相关区域、采集组织活检，或监控血液的标志物，如PSA或CA125。但是，这些都不太理想：成像的分辨率不高；活检是侵入性的，有一定的风险性，难以用于肺部等脆弱的器官；而良好的标志物是少之又少。而活检液体活检的检测方法，可以捕获到肿瘤脱落进入血液的肿瘤细胞（CTC）或DNA（ctDNA），从而替代了从肿瘤本身提取组织（这么腻害，能不大受欢迎吗）。

ctDNA是什么？

人体血液循环系统中不断流动的携带一定特征（包括突变，缺少，插入，重排，拷贝数异常，甲基化等）来自肿瘤基因组的DNA片段，被称为循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA），含量低，约占整个循环DNA的1%，甚至只有0.01%。

ctDNA来源：

• 来自于坏死的肿瘤细胞；
• 来自于凋亡的肿瘤细胞；
• 循环肿瘤细胞；
• 来自于肿瘤细胞分泌的外排体。
  
  

ctDNA有多火？

近年ctDNA相关发表文章数（pubmed数据库）。

ctDNA检测原理

由于肿瘤特异性的ctDNA并不存在于正常细胞中，他们为癌症检测提供了一种十分敏感和特异的方法，临床应用的可行性甚至超越CTCs。于是在假阴性率高和难以深度分析的CTCs面前，ct DNA无疑是满满一碗“鸡血”啊！

ctDNA片段大小通常为160-180 bp，在血液中半衰期2小时，携带有SNP（点突变）、InDel（插入缺失）、CNV（拷贝数）、fusion（融合基因）等突变信息，在人体血液循环系统中不断流动，可实时反映肿瘤患者当前信息。

（注释：肿瘤组织的细胞脱落，会进入血液系统中，通过捕获这些游离的ct DNA片断，我们可判断肿瘤的分子分型，从而对症下药。）

ct DNA检测的技术

（注：Sanger sequencing: Sanger 测序； Pyrosequencing: 焦磷酸测序；ARMS: 突变扩增阻滞系统；Beaming: 数字PCR-流式技术；PAP：焦磷酸解激活的聚合反应法）

癌症个体化深度测序 (CAPP-Seq)

除了以上方法，来自Stanford医学院的科学家研究出一种检测ctDNA的方法，具有高敏感性，他们将这种方法命名为CAPP-Seq（深度测序肿瘤个体化建档法，cancer personalized profiling by deep sequencing）。

该方法利用定制化的突变位点库作为”筛选器”，对样本进行靶向捕获后再进行超深度测序（可达到10000X），其对肿瘤的ctDNA检测灵敏度更高，特异性更强，与全外显子测序等相比经济可行。

研究者从肿瘤基因突变数据库（COSMIC）等来源找复发突变相关的外显子，再从肿瘤基因图谱库的407位NSCLC患者全基因组测序结果筛选，Selector 区域有139个基因的521个外显子和13个内含子，约125K，占人基因组的0.004%；StageI  检出率50%；Stage II-IV  检出率100%；特异性可达到96%；突变检出率0.02%。

研究者更进一步探究后发现，用CAPP-Seq测定的ctDNA的水平和肿瘤体积（肿瘤体积用CT和PET评估测定）之间存在显著相关性（p=0.0002，R2=0.89）。

---

然而，在前段时间发表在Science Translational Medicine期刊上的有关II期结肠癌的研究，则表明基于检测血液中ct DNA片段能够准确地预测小部分---并不是所有---早期结肠癌患者癌症复发的可能性。

在这篇paper中，230名结肠癌患者当中，20人的血液中存在结肠癌相关DNA片段，包括14名未接受附加的化疗，而6人接受了。在这14人当中，在研究期间，通过CT扫描，11人发生癌症复发。在这接受化疗的6人当中，有3人在研究期间经历癌症复发。另外，还有14人经历癌症复发，但是血液基因测试结果表明这些人不存在结肠癌相关DNA。

悬而未决的问题

近年来ctDNA的检测方法层出不穷，利用突变标志或者基因重排等来检测ctDNA都是近几年来的新突破，越来越多的学者致力于ctDNA检测的研究。尽管ctDNA研究越来越热，在真正走入临床，还是有很大的困境（就像CTCs的百年历史，也未能发挥实质性的作用）！

• ctDNA是否能真实反映癌症的特征？（即使检测到的突变，是否就能说明已患肿瘤？是否造成医生过于依赖这项技术？）
• 转移瘤是否和原发瘤释放同样多的DNA？
• ctDNA提供的信息是否真的能够挽救患者生命或者提高他们的生活质量呢？（只能够实施监控肿瘤是远远不够的）
• ctDNA在不同的肿瘤类型、分期和患者中的普遍程度如何？（即使检测到ctDNA，也无法追踪是体内哪里产生的）
  
  

---

后记：

我们的科学家，就像一支不知疲倦的侦察奇兵，即便只是肿瘤细胞路过的遗落信息甚至死亡的残骸，也要探寻出变异密码。ctDNA可能一时半会儿还无法决定癌症的治疗，不过它仍不失为一个宝贵的研究工具。面对ctDNA这股旋风，也算是一盏明灯，给予我们寻找答案的期望。（期待在不太远的将来，再次说起肿瘤，小编能微微一笑：切，再也不怕你了！）

（注：小编不是专业的，如果对此的认识有不对的地方，还望指出，小编会好好学！）

来源： 基因姑娘GeneGirl