阴性对照和空白对照

mageratkarry

大家认为双抗夹心法中的阴性对照和空白对照如何设置呢？都是加什么呢？

涩涩的茶

需要注明具体方法学，最好说个具体的项目

mageratkarry

例如某一激素，想用病人样本血清做双抗夹心，先包被抗原，然后加入病人样本血清，然后再加入酶标抗体，显色，酶标仪读数。
阴性对照：我把样本血清换成了抗体稀释液，其他和处理组一样
空白对照：样本血清那一步我什么都没加，其他步骤和处理组一样。
这样做阴性对照和空白对照尚可否？？？

涩涩的茶

首先要搞清楚空白对照和阴性对照的作用
空白对照：在ELISA单波长测试时调零用的。
阴性对照：其与阳性对照同时作为该次测试的有效性评估，阴性对照和阳性对照的测试值必须满足规定的要求才能说明该次测试有效。
如果你是用单波长测试的话，并且是血清原液测试，那么空白对照可以不加血样和酶标物，其它步骤相同。
阴性对照需要用正常人样本。

另外，既然是双抗体夹心法，为什么要包被抗原呢？是描述错误？
如果是小分子激素，不能用双抗夹心法，要用竞争法
所以，你最好举个实例，便于说明问题

mageratkarry

首先抱歉，我把包被抗体描述成抗原了
例如β-FSH，我们有1对配对好的抗体A和B,
1 包被抗体A，然后封闭；
2 加入医院病人血清；分高中低3个浓度
3 加入B-HRP
4 显色
5读数 45nm/620nm
阴性对照：第二步我加的是抗体稀释液（我们从医院得不到阴性血清）；空白对照什么都没加；其他同处理组