定量和半定量的区别

恰恰洽 · 发表于 2015-1-16 15:47

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求助各位定量和半定量的区别

他们和普通PCR，荧光定量PCR有什么关联呢？

diana_zhang · 发表于 2015-1-17 10:17

你好，你的问题回复如下：
1、定量分析：是分析中依据统计数据，建立数学模型，并用数学模型计算出分析对象的各项指标及其数值的一种方法。
2、半定量分析：准确性比定量分析稍差的分析方法，特点是简单、迅速、费用低。

定量和半定量分析是依据在分析中所能够取得的样本量，测量样本量的准确度和对分析结果的精度要求而确定的数据的分析方法。是可以用于任何实际数据统计的不同的统计分析手段。两者不可以同时使用。与你所问的普通PCR和荧光定量PCR没有任何的直接关联。
普通PCR可以根据对分析结果的精准度要求而选择采用定量分析或半定量分析，而荧光定量PCR只能采用定量分析。

huangchj03 · 发表于 2015-1-19 09:32

本帖最后由 huangchj03 于 2015-1-19 09:35 编辑

diana_zhang 发表于 2015-1-17 10:17
你好，你的问题回复如下：
1、定量分析：是分析中依据统计数据，建立数学模型，并用数学模型计算出分析对 ...

我是这样想的，他问的问题是采用普通PCR进行的半定量分析与采用Q-PCR进行的定量分析的区别。
在科研领域经常能看到一些低水平的文章常常采用普通RT-PCR的电泳结果进行灰度分析，根据灰度分析的结果进行定量分析，我们常常称这种分析方式叫做半定量-PCR，他的做法很简单，就是采取类始于Q-PCR相对定量分析的做法，只是减少扩增循环数，通过摸索使采用的循环数处于扩增的指数扩增期，在通过电泳的亮度确定终产物的量，由于都处于指数增长期，因此终产物的量与初始量依旧呈现一定的指数式关系，因此可以进行相对定量分析（其实类始于只是看不到每一个循环具体的荧光强度而已，不是实时显示罢了），但是采用了电泳等分析操作，精确度和可靠度都大大减低（人为造假的可操作性非常高，并且难以鉴定是否造假），因此称为半定量-PCR分析，常常用于一般高校实验室的前期摸索阶段，如果发高水平文章，建议还是采用荧光定量PCR分析，数据在精确度和可靠度上远胜于普通PCR。
以上只是我个人的看法，不足之处请更正，谢谢

恰恰洽 · 发表于 2015-1-19 10:04

huangchj03 发表于 2015-1-19 09:32
我是这样想的，他问的问题是采用普通PCR进行的半定量分析与采用Q-PCR进行的定量分析的区别。
在科研领域 ...

那这样子说是不是准确的检测就是定量，不太准确的就是半定量呢？

如果是，这个准备和不太准备又依据什么而定的呢？

huangchj03 · 发表于 2015-1-19 10:34

恰恰洽发表于 2015-1-19 10:04
那这样子说是不是准确的检测就是定量，不太准确的就是半定量呢？

如果是，这个准备和不太准备又依据什 ...

采用Q-PCR在定量分析上确实要比采用终浓度的半定量PCR要准确和精密一点，但是这都是相对的。随着技术的发展，新的更加精确的定量方法的出现如数字PCR等，在定量上可能更加准确。 Q-PCR的定量是建立在数学模型上，可以根据实时监控的数据调整基线使数据更加准确，这一点上，普通PCR做不到，甚至我们不能判断得到的结果是不是处于指数增长期，也无法判断这个反应的扩增效率是否一致，因此，普通PCR只能作为定性和半定量的工具，即使是用作为半定量，其数据也仅仅供参考。