MPO 技术报告

检验医师

髓过氧化物酶（MPO）是一个大量存在于嗜中性多核白细胞（粒细胞）的血红素蛋白，细胞激活后此酶被分泌到细胞外。二十世纪初期人们就已经发现了白细胞细胞质颗粒中过氧化物酶的存在，但是直到二十世纪四十年代早期此过氧化物酶才第一次被提取。天然MPO是一个共价结合的四聚体复合物，由两个糖基化α-链（分子量59-64 kDa）和两个未糖基化β-链（分子量14 kDa）组成，总分子量为大约150kDa，理论等电点为9. 2（1）。

MPO在嗜中性粒细胞抗微生物效应中起重要的作用。它可以催化氯离子的氧化，生成强抗微生物剂次氯酸。另一方面，经证实MPO可氧化修饰低密度脂蛋白（LDL），形成氧化型低密度脂蛋白，而氧化型低密度脂蛋白被认为是促进动脉粥样化形成的主要因素（2）。基于这个原因，人们认为MPO参与了心血管疾病的诱发和恶化。MPO具有很强的促炎症作用，可能直接导至组织损害。而且，已证实MPO还参与了肺癌（3）、老年痴呆症（4）和脑脊髓多发性硬化（5）的发病过程。

MPO被认为是目前最有前景的心脏标记物之一。最近证实患者血液中MPO浓度的升高可作为动脉硬化（6）和冠心病的风险指标（7）。它预示着心肌梗死的早期风险，以及胸痛患者随后30天和6个月内其他主要心脏并发症的风险（8，9）。MPO作为标记物的价值在于它可以独立预测预后，而不依赖于其他已知的生化风险因子，包括肌钙蛋白、肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）、C-反应蛋白（CRP）和血脂组成。不同于肌钙蛋白I或T、CK-MB和CRP，MPO能在没有心肌坏死的情况下鉴别患者心脏病恶化危险性（8）。所有的这些因素使患者的MPO检测成为鉴别胸痛患者预后的不可缺少的一步。

一些自身免疫性疾病会产生抗MPO自身抗体。MPO是抗嗜中性粒细胞细胞质抗体（ANCA）的主要目标，而ANCA是某些系统性血管炎的血清标记物，例如结节性多动脉炎、微观多动脉炎和肺嗜酸性肉芽肿（Churg-Strauss症候群）（10）。有报道发现，低到中等水平的抗MPO自身抗体也存在于风湿性关节炎患者血液中。

HyTest有多年制备人MPO的经验。我们的抗MPO单克隆抗体适用于MPO定量免疫检测系统的开发。已证明使用这些抗体的夹心免疫检测系统能精确检测患者血液样品MPO的水平。

1 人髓过氧化物酶

来源： 人白细胞。组织捐献者的血液样品未检测到乙型肝炎表面抗原，艾滋病-1和艾滋病-2抗体，丙型肝炎病毒及梅毒。

纯度： >90%

物理状态： 冷冻干燥品

应用： MPO特异性自身抗体检测系统用抗原，MPO免疫标准品，用于抗体生产的免疫原，MPO生物化学及免疫化学研究

保存： -20℃

人MPO从人白细胞中提取，可被用作MPO特异性自身抗体检测系统的抗原，MPO免疫标准品，抗体生产用免疫原，并可用于MPO生物化学及免疫化学研究。MPO还原性凝胶电泳显示有两条主要的条带，表观分子量分别为60 kDa（MPO α-链）和15kDa（MPO β-链）。凝胶电泳还显示一条次要的条带，表观分子量为大约40 kDa。这条带表现了MPO α-链的免疫活性，很可能代表了MPO α-链的降解产物（如下图）。

2 抗MPO单克隆抗体

宿主动物： Balb/c小鼠

融合用细胞系： Sp2/0

抗原： 人MPO

提纯方法： 蛋白A亲和层析

物理状态： 单抗溶于PBS，并含有0.1％叠氮钠

应用： MPO免疫检测系统，MPO免疫亲和层析提纯，MPO免疫印记检测

杂交瘤细胞由Sp2/0骨髓瘤细胞和用纯化人MPO免疫的Balb/c小鼠的脾细胞融合而产生。所有的单抗都通过直接ELISA、免疫印记和夹心免疫检测方法用纯化抗原测试。

2.1 应用

2.1.1 夹心定量MPO免疫检测

HyTest从几百种单抗组合中筛选出最好的单克隆抗体组合以用于MPO夹心免疫检测系统，这些单抗组合灵敏度高，特异性强，并具有良好的反应动力学。如前所述，患有某些系统性血管炎，肺嗜酸性肉芽肿和某些其他疾病的患者血液中含有抗MPO自身抗体。检测样品中MPO自身抗体的存在可能会严重影响MPO的免疫检测结果。我们用含有高MPO特异性自身抗体滴度的几个血液样品测试了多个最敏感的双位点单抗组合，筛选出了对自身抗体不太敏感的单抗组合。

最佳用于夹心免疫检测系统的单抗组合（捕获抗体–检测抗体）：

16E3 – 18B7

18B7 – 16E3

18B7 – 4B3

19G8 – 16E3

二例MPO夹心免疫检测系统校准曲线

A：16E3-18B7, B：18B7-16E3

2.1.2 MPO免疫印记检测

多个单克隆抗体—4A4、16G6、18B7和19H2—可被用于MPO免疫印记检测。

MPO经还原性凝胶电泳后通过抗MPO单抗进行免疫印记分析

泳道1：16G6，泳道2：18B7，泳道3：19H2

3 无MPO血清

来源： 正常人混合血清

提纯方法： 免疫亲和层析

物理状态： 冰冻液体

保存： -20℃

无MPO血清由正常人混合血清通过免疫亲和层析制备。亲和吸附剂的基质使用几种识别抗原不同位点的单克隆抗体制备。无MPO血清可被用作制备标准品和校准品的基质。

来源：hytest