最近，来自意大利肿瘤研究中心（Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori）的研究团队在BMC Genomics杂志上发表了一篇最新研究进展，他们首次利用QuantStudio3D digital PCR对肺癌病人的microRNA进行定量检测，这项技术有希望成为癌症临床研究中miRNAs分析的常规检测方法。 MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码RNAs，长约19-24个核苷酸，通过与mRNA的3’端非翻译区结合调控基因的表达。已有研究发现，在血浆、血清、唾液、痰、尿液等不同标本本中均能检测到了循环miRNA（circulating miRNAs），循环miRNA的表达水平与癌症进展，治疗反应和患者生存期密切相关，表明循环miRNA是一种非常有潜力的无创生物标记物，可用于癌症等重大疾病的早期诊断和预后评估等。但是由于研究数据来源于不同的实验方法和技术，目前还没有统一的均一化方法处理数据，阻碍了循环miRNA研究的发展。 QuantStudio3D digital PCR是一种基于芯片的数字PCR技术，无需标准品就能精准地绝对定量核酸分子。文章中研究人员使用digitalPCR，可以对200ul血浆中的循环miRNA进行绝对定量，实验方法和流程如下：  在血浆样本、肺癌组织和细胞系中，研究人员对5个与肺癌发生相关的miRNA（mir-16-5p,mir-21-5p, mir-126-3p, mir-486-5p and mir-660-5p）表达水平进行绝对定量，并验证了mir-16-5p在正常肺组织和肺癌样本中的表达有显著差异。  为了验证该方法的可重复性，对5个不同样本进行平行重复实验和独立实验，结果显示intra-run和inter-run变异系数在4%左右，表明digital PCR可重复性很好。  综上所述，digitalPCR可以绝对定量不同生物学标本的miRNA表达水平，例如肺癌病人的血浆或组织，有利于推动miRNA作为新型生物标记物的研究。 参考文献： Conte, D., Verri,C., Borzi, C., Suatoni, P., Pastorino, U., Sozzi, G., & Fortunato, O.(2015). Novel method to detect microRNAs using chip-based QuantStudio 3Ddigital PCR. BMC Genomics, 1–11. doi:10.1186/s12864-015-2097-9 |
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