PCR检测作为体外诊断领域的核心技术，近年来随着市场需求的更新，为确保在新冠疫情、非洲猪瘟等大规模疫情爆发和管控过程中检测结果的及时、准确，IVD企业纷纷开始全预混产品的开发，各大原料厂家也及时在原料端进行迭代更新，可全预混试剂严重的非特异扩增现象依旧困扰着大家，成为无法彻底解决的难题。如何解决全预混试剂的非扩增特异性问题已然成为当下分子生物学领域的一大挑战。目前热启动DNA聚合酶的封闭效果只有90%-95%，一旦把引物探针和酶以及buffer全部预混，未封闭住的酶活会使体系产生大量的非特异性扩增。为弥补热启动酶这一缺陷，彻底解决非特异性扩增问题，奥利芙生物隆重推出革命性新产品：热启动dNTP—“Thermal-initiated dNTP Mix”！ 1 为了验证Thermal-initiated dNTP Mix的封闭效果，我们选择在恒温PCR（lamp）体系进行封闭效果验证，整个PCR过程中温度不超过60℃。
图1-A 恒温PCR体系下，Thermal-initiated dNTP Mix 封闭效果图 图1-B Thermal-initiated dNTP单独提前热激活之后，热启动dNTP与普通dNTP在lamp体系中的扩增效率对比 2
图2 变温PCR体系下，Thermal-initiated dNTP Mix 与普通dNTP扩增效果对比图 为了验证Thermal-initiated dNTP Mix产品的解封闭效率，我们设计了变温PCR对比实验，在变温PCR条件下，Thermal-initiated dNTP Mix无需单独加热，在正常的pcr程序中就可以快速释放，并且其扩增效率与dNTP一致（如图2）。 3 为了探究Thermal-initiated dNTP Mix对于减少非特异性扩增的效果，我们进行了毛细管电泳实验。在STR多重体系下，我们将Thermal-initiated dNTP Mix和普通dNTP产品做对比。结果显示，全预混放置3天后，热启动DNA聚合酶与普通dNTP产生大量非特异扩增(图3下红色方框内)， 相比之下，Thermal-initiated dNTP Mix 与热启动DNA聚合酶共同作用显著减少非特异性扩增(图3 红框区域)。Thermal-initiated dNTP Mix与热启动DNA聚合酶共同使用可以有效降低非特异性扩增产物的生成。
图3 Thermal-initiated dNTP Mix与普通dNTP Mix 毛细管电泳效果图对比
问题一：产品是否做过稳定性实验(-20℃保存，4℃保存，冻融次数)？ 我们做过该产品-20℃/4℃/冻融次数的几项产品稳定性实验，在这几项参数里，产品的稳定性与普通dNTP无差异。 问题二：产品的启动温度是多少？完全解封闭的条件是什么？ 产品在 50 - 60℃时开始呈现解封趋势，当温度达到 95℃，加热 30s - 60s左右，基本全部解封。 问题三：产品是否能应用于RT-PCR体系？ 针对RT-PCR系统，多个厂家用该产品做过RT-PCR测试。测试结果显示，部分厂家使用效果理想，然而也有部分厂家反馈使用不太理想，需要优化。综合来看，反馈结果存在差异，我们推测这是由于各厂家体系不同所致。因此，建议购买本产品后，根据各家具体体系进行调试，以达到最佳效果。 问题四：产品是否能应用于lamp体系当中？ 我们对于该产品的封闭性验证是基于lamp体系的恒温特点来展开的，实验结果表明产品在 lamp 体系中封闭效果极强，所以从实际应用角度出发，不建议将本产品应用于 lamp 体系。 问题五：该产品是否与国外的同类型产品做过对比？ 目前全球只有两家公司有热启动dNTP产品，除了我们，国外还有一家公司在做该类型产品，针对产品的稳定性、封闭性能和扩增效率等关键指标，我们与国外那家的产品进行了数据对比。结果显示，奥利关生物的产品在性能方面与国外产品相当，但在价格方面，我们具有显著优势！ 问题六：产品是否适用于UDG酶，是否有热启动的dUTP产品？ 目前我们现货是含ACGT的热启动dNTP Mix，近期很快会推出含有ACGU的热启动dNTP Mix。 问题七：可否单独提供ACGTU五种单体？ 我们暂不单独售卖 ACGTU 五种热启动dNTP单体，不过若有相关需求，我们可以通过商业合作的形式，探讨进一步合作的可能性，共同寻求满足双方需求的解决方案。 奥利芙生物是一家从事核苷、核苷酸及其衍生物、荧光标记物等分子诊断核心原料产品研发、生产和销售为一体的高科技企业。公司检测中心通过CNAS认证，并拥有国内领先的核苷化学修饰，纯化技术及质控平台。公司提供的产品应用于分子诊断PCR、核酸质谱，基因测序、核酸药物等领域。公司2023年11月完成A轮融资，投资股东利安隆（300596）将持续为奥利芙赋能。 产品咨询 咨询订购
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