IVD质控品定量的最佳方法

    在体外诊断（IVD）行业中，涉及的各类参考物质如参考品、质控品、质控物、对照品、标准物质、标准品、校准品、校准物等等，在产品研发、生产、使用、监管等过程中分别发挥不同的作用。这些参考物质定值的准确性是至关重要的。

    分子诊断产品的参考物质定值，通常是指对参考物质中的核酸（DNA或RNA）拷贝数的测定。传统方法，是用基于qPCR平台的绝对定量，主要过程是合成含有待测靶标序列的质粒，测定高浓度质粒的质量浓度后按照质粒大小换算拷贝数，再以此高浓度质粒为标准进行梯度稀释做qPCR 拷贝数和CT值对应的标准曲线，后续待测样本的CT值带入标曲公式，可得出样本的靶核酸拷贝数。这个方法的主要问题在于：

    当然如果上述问题都可以尽量优化到最佳程度，qPCR的定量也是可以做到比较准确的。但是否有更好的方法，直接屏蔽这些问题呢？那就是数字PCR！

    自2008年第一台商业化数字PCR平台问世，数字PCR开始正式走向广大用户。数字PCR技术是将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴，其中每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，对每个微滴进行检测，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。数字PCR是一个全新的绝对定量方式，与传统定量PCR相比，其结果的精密度、准确性和灵敏度更佳，结果不依赖Ct值，直接给出靶序列浓度，实现真正意义上的绝对定量。

    全球数字PCR赛道，从2016年以后进入活跃状态，目前国内外已发布几十款产品。数字PCR最核心的技术是样本的分割，根据分割方法主要可分为两大派系，一是基于微孔板的芯片式分割，二是基于微流控技术的微滴生成式法。基于微孔板法分割会影响样本均一性（微孔虽是大小均一，但是入孔的试剂体积无法精确控制），进而影响结果准确性。目前以油包水的微流控液滴生成技术为市场主流，但微流控芯片的微通道对表面光洁度、表面能、表面活性剂等要求很高，且国内没有成熟配套的工业制造体系，使得整体成本还比较高。苏州思纳福采用的是一种全新的液滴生成方法——振动注射技术，通过毛细管加样针插入到油面下，快速摆动的同时均匀向外排出液体形成微滴，液滴大小仅由流速和震动频率决定，生成的微滴体积精度高且体积可控，液滴批间一致性良好。2022年3月思纳福DQ24数字PCR率先进入创新医疗器械特别审查程序，有望成为国内首批获得三类医疗器械注册的数字PCR平台。目前，IVD行业多家单位已使用Sniper设备进行标准品的制备和检测，Sniper产品和技术在IVD质控品领域得到了充分的认可！

    总的来看，数字PCR的设备价格和使用成本仍相对较高，2023年以来后疫情时代的经济形式下，有预算采购这样的仪器设备的企业明显减少，而相关的定值需求仍然是大量存在的，外送技术服务成为一个更划算的方案。杭州沃森生物于2021年开始，基于思纳福的DQ24全自动数字PCR一体机，推出了数字PCR定量检测技术服务，目前已为数十家企业和科研单位客户提供服务。

杭州沃森作为苏州思纳福签约代理商，数字PCR试剂耗材成本更可控，服务价格更具竞争力，欢迎来电咨询：0571-86495259！