最近有小伙伴后台留言想要看一些关于抗体原料筛选实验方面的内容，今天我们就以卵泡刺激素(FSH)项目为例，探讨一下如果要做这个项目我们怎么来进行原料筛选。这里我们假定我们要做的平台是吖啶酯的发光平台。 在开始原料筛选前，我们需要通过查阅文献资料，了解这个项目有一些什么特点，查阅资料包括：与FSH分子结构、作用机理、临床病症有关的文献；不同检测方法检测FSH并进行比对的相关文献；国内外各厂家的FSH产品说明书。通过这些资料我们可以整理得到一些对我们原料筛选有帮助的信息：FSH有α和β两个亚基，其中α亚基与LH、TSH、HCG结构一致，β亚基具有独特性；FSH检测结果主流厂家有较好的相关性；FSH检测在灵敏度和检测范围上没有困难点。根据这些信息，我们开始挑选一些我们需要的抗体原料，要求是抗体的位点应该不能是单独的α亚基。 假设我们最终拿到了5对抗体需要筛选，10个抗体考虑两两组合有90种组合，这里就有两种选择，一种是仅针对推荐的抗体配对进行筛选，只做5组抗体筛选（抗体对正反10种组合），该选择定义为模式1。还有一种就是把90种组合全做了，该选择定义为模式2。一般来说市场上的成熟项目的开发建议采用模式1进行筛选，工作量低。对于一些新项目或者难度大的项目可以采用模式2进行筛选。这里我将两种模式的抗体筛选都讲解一下。根据我们选择的模式，我们把抗体分别进行磁球包被及吖啶酯偶联，这里的包被和偶联方法及后续的试剂缓冲液，反应体系等因素在没有具体优化前都可以按照最通用原则来进行选择，选取你使用最多的方案作为初始方案。第一个抗体筛选实验是反应性的筛选，选出有足够反应性的组合进行后续实验。针对模式1：由于检测组合数量较少，我们可以选取5-10例测值有梯度的临床样本（0值样本没有可以使用缓冲液代替）进行检测，根据检测结果挑出反应性强且呈梯度的抗体组合。针对模式2：由于检测组合数量多，可以混合2-3个有浓度梯度的样本（样本不够可以用抗原稀释）进行检测，这里主要就针对反应性，筛选出15组以内的反应性较强且抗体覆盖种类多的抗体组合，再按照模式1的筛选方案进一步筛选。 在FSH这个项目中，由抗体所决定的最重要性能是灵敏度和与参比方法的相关性水平。通过以前我的文章里提到的LOB、LOD的估算方法，结合所做平台的精密度水平可以预估出各抗体组合的LOB、LOD水平，如果估算值与目标值的差距在4倍以内，通常都可以通过后续优化来实现目标水平。针对相关性的筛选，一般选择检测40例左右的有参比方法测值且分布较均匀的样本。由于此时还没有校准品无法计算样本测值，可以在检测的样本中选取几例浓度有梯度的样品，将其作为定标品拟合标曲计算浓度，用计算的浓度与参比方法测值进行相关性计算；也可以直接比较信号水平与参比方法测值的相关性（需考量剂量反应曲线造成的r值损失）。如果这时某对抗体的相关性已经符合了你的要求，抗体的筛选工作就可以基本完成了，不过这个情况发生的概率通常较小。如果这时的最优抗体对还无法满足需求，则需要首先分析一下已有抗体对结果的相关性数据，如果不同抗体配对间相关性差异较大，最优的配对与目标有差距但不大的情况下，可能进一步扩充抗体的筛选就可以找到符合要求的抗体。如果不同抗体间相关性均不好，与目标差距较大，这时要评估一下目标的合理性。如果目标合理，则要从相关资料中找找该项目有没有什么关键的试剂组分，比如NSE项目检测中需要在试剂中加入镁离子稳定检测物，E2项目中试剂需要有氯化锌促进E2的释放等。这里再提一下找这些关键组分的小技巧，如果是化学发光项目可以去罗雅西贝的外网主页上找对应项目的MSDS文档，有些说明书里没有记录的关键组分在MSDS中有记录。
罗氏主页搜索其MSDS的示例 针对筛选过程中那些没有反应或者反应性弱的抗体，建议更换包被或者交联方法，比如磁微粒包被如果之前是共价包被的，可以换成物理吸附或者其他活化基团微粒重新包被后评估，与吖啶酯偶联的抗体也是相似的方法，确保不是因为包被或偶联导至了抗体失活或者效价降低。 上面介绍的抗体筛选方法都是基于将抗体进行包被或偶联后进行的，有些平台包被或者偶联的成本较高，将所有抗体包被或者偶联不现实。这时可以将不同抗体通过酶标板包被的方式来进行初筛，缺点是酶标检测结果不一定都适用你的平台。也可以进行抗体结合表位的筛选，通过与已知表位的抗体进行竞争实验来确定其他抗体的表位是否相似，将所有抗体按照相似表位进行分组，每组选取亲和力水平高的抗体进行后续筛选实验。在进行上述实验时可以将其他已上市产品的中含有对应抗体的试剂组分也进行分析比较，挑选与其表位相似的抗体。抗体表位的筛选有助于加深大家对所研发的项目的认识，方便后续各种问题的判断及分析。 不同项目，不同方法学的原料筛选都会有各自的一些独特性，但是基本的方向和方法还是相似的，希望这篇文章能对你有所帮助。 |
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