近年来全球感染性疾病的发病率有所上升,病原体呈现多样化和复杂化的发展趋势,半数患者存在病原体不明的困境,病原体的快速诊断面临严峻挑战。目前用于临床病原体检测的方法主要包括传统培养法、PCR法、宏基因组测序(mNGS)、病原靶向测序(tNGS)等。新冠核酸检测让荧光PCR技术大放异彩,新冠之后宏基因组测序mNGS抗疫扬名,一度被临床医生所青睐,逐步走向寻常百姓家。tNGS靶向测序技术更是异军突起,以其对“PCR”和“NGS”兼容并蓄的优势和快速、精准、高性价比的测序服务,在临床检验领域正受到越来越多的关注和使用。 更快、更精准、更经济 —tNGS靶向测序 靶向基因测序(tNGS),又称病原体靶向测序。当前tNGS技术可进一步延伸为PCR扩增子富集测序和基于探针杂交的捕获富集测序,两种均需要标本前处理、核酸提取,但富集方法略有差异: PCR扩增子富集: 采用两轮PCR法,第一步PCR是目标序列与基因特异性引物的结合,扩增目标序列;第二步是通过PCR引入带有Index序列的测序通用接头,并对目标序列进行富集,纯化后即可完成检测文库的构建。 靶向富集技术(TE): 常规文库构建后,设计与病原体参考序列互补的小RNA/DNA探针,探针靶向富集使整个基因组被重叠探针所覆盖,杂交反应捕获靶标序列。 靶向扩增子富集 靶向探针捕获富集流程 目前每种技术路线在临床应用方面都有其不可替代的优势,同时也有暂时无法解决的问题。未来很长一段时间,tNGS扩增子测序法和捕获检测仍会长期并存,为患者提供全方位、高性价比的检测体验。为临床提供对的检测,而不是多的检测,让病原检测回归理性检测是大势所趋。 翌圣tNGS多重扩增产品 覆盖感染疾病领域多需求 翌圣通过ZymeEditorTM双向分子酶理性设计与定向进化平台开发多种高性能分子酶,搭配超低残留分子酶生产工艺与UCF.ME®超洁净分子酶生产基地,可规模化提供用于tNGS建库的全套高性能产品和超低残留分子酶原料,助力解决病原检测中的背景菌干扰,提高检测准确度,实现感染临床“轻-危-急”需求的全面覆盖。 高灵敏、超低残留分子酶原料: Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA Polymerase 低宿主DNA残留的Taq DNA聚合酶 宿主DNA残留低:E. coli基因组DNA残留<0.5 copies/ 100 U; 核酸酶残留低:无核酸外切酶、切口酶、RNase残留; 线性范围广:在qPCR检测体系中,检测线性范围为1×106 copies/T-1×101 copies/T; 稳定性好:4℃、37℃处理14天,酶活无明显变化。 以1×106 copies/T的KRAS基因重组质粒为高浓度模板,后续依次以10倍梯度稀释,直到1×101 copies/T,检测线性范围,相关性R2=0.9956。 不同批次Taq DNA 聚合酶进行宿主(E.coli)基因组DNA残留检测,结果显示宿主基因组DNA残留远低于0.1 copies/ 100 U。 翌圣均一性多重扩增产品 4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix For Pathogen 4×病原多重PCR预混液 操作简洁:高乘预混液包含除引物和DNA模板之外所有组分 性能优:高均一性、高特异性和高灵敏度,背景残留低 兼容广:兼容GC含量在25%-70% 兼容多种应用场景:tNGS病原微生物检测、环境微生物鉴定和食品安全检测等。 表2. 使用zymo病原DNA标准品,分别进行酶切建库和tNGS多重扩增,测序结果显示10种微生物均可有效检出。 共建库试剂盒 Hieff NGS® DNA&RNA Library Co-Prep Kit DNA/RNA快速共建库方案 一管式建库:DNA&RNA一管式建库,一步高效完成cDNA合成, 降低建库时间和成本:2.9 h内完成共建库,其中cDNA合成耗时35 min,酶切法建库耗时2.3 h; 背景菌残留低:在常见10-100 ng RNA建库场景,大肠等常见工程菌残留符合要求,试剂较为纯净 表3. 使用共建库试剂盒,搭配不同比例的小牛gDNA和293 RNA样本,2.9 h内完成共建库 极致交付、高性价比,一直是感染性疾病患者的心声。随着PCR、mNGS和tNGS检测技术的不断发展,从核酸提取到文库构建的各个环节,在临床应用中还有很多实际问题需要解决。翌圣生物将会持续优化产品性能,开发出更符合临床应用的解决方案,助力感染性疾病精准诊断! 表4. 翌圣病原检测产品解决方案 关于翌圣生物 翌圣生物科技(上海)股份有限公司是一家聚焦生命科学产业链上游核心原料,从事分子、蛋白和细胞三大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业。核心产品覆盖qPCR系列、NGS系列、逆转录系列、核酸提取与纯化系列、PCR系列、分子克隆系列、体外转录系列、抗体、蛋白纯化系列、蛋白分析系列、重组蛋白、细胞分析系列、细胞培养系列、细胞转染系列、报告基因检测系列等多个品类,广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。 |