设计化学发光(CLIA)试剂盒需要考虑不同的方面,包括试剂开发和方法选择的原材料,以及检测方式的选择。材料供应商是成功设计和开发检测的一个关键因素。 一个理想的供应商不仅要能以可靠的成本提供所需的原材料,而且要能提供所需的批量,以扩大试剂的规模。此外,供应商应提供不同的批次,以评估批次与批次之间的差异性,以检查对将要开发的检测方法的影响。 磁珠选择的策略 磁珠有不同的尺寸,从纳米到几微米不等。较小的磁珠可能需要更多的时间来使用磁力分离器进行分离。磁珠的分离时间在很大程度上取决于磁性颜料的数量。更高的颜料百分比将导至更快的磁珠分离。应在磁性色素和磁珠的大小之间达到平衡,以保持磁珠的正确密度。 设计CLIA测定需要考虑不同的方面,包括试剂开发和方法选择的原材料,以及检测方式的选择。材料供应商是成功设计和开发检测方法的一个关键因素。 用于CLIA的化学改性磁珠 一个简单但不太稳定的磁珠表面共轭策略可以通过抗原或抗体直接被动吸附在 "普通 "磁珠的表面来实现。另外,如果抗原或抗体的共价连接对检测很重要,那么修改磁珠的表面化学成分是一个很好的选择。活性基团利用磁珠的大表面积,为你的抗体或抗原提供丰富的锚点,使之与磁珠共价连接。 可使用的预激活化学品的一些例子是流行的Tosyl基团或环氧树脂。还有其他需要激活的基团,如羧基(-COOH)、胺(-NH2)和羟基(-OH)。这种做法也被称为磁珠的化学功能化。 用于CLIA的生物改性磁珠 生物修饰磁珠(也被称为表面生物功能化)也是CLIA开发的一个常见策略。 有几种类型的生物修饰磁珠。所选择的抗体或抗原可以用生物素连接物进行修饰,与用链霉素修饰的磁珠结合。蛋白A与大多数免疫球蛋白的Fc区结合,使其成为将抗体固定在磁珠上的有吸引力的选择。 同样地,蛋白G与一系列免疫球蛋白的Fc或Fab区结合,可用于固定抗体。有时蛋白A和G一起使用以增加潜在的抗体结合谱。也可以连接特定的蛋白质,但这需要优化。 当选择生物修饰的磁珠用于CLIA测定时,重要的是检查这些磁珠与样品类型的兼容性,以防止样品的成分与磁珠的生物表面发生非特异性的相互作用。 |