随着COVID-19大流行期间对分子诊断检测的空前需求，唾液逐渐替代传统鼻咽拭子（NP）成为合适的检测样本类型，尤其适用于识别儿童和部分成人的新冠感染。 鼻咽拭子通常被认为是呼吸道病毒检出率最高的样本类型，在常规临床实践和许多呼吸道病毒监测研究中经常作为唯一的样本类型。但是，鼻咽拭子的瓶颈是它需要经过专业训练的人员操作采集。
相比之下，唾液样本可通过非侵入性手法自行采集，避免了健康人群与感染患者接触，减少等待时间，并无需个人防护设备即可操作。
对传染性疾病的控制很大程度上依赖于对大量人群进行筛查的能力，唾液样本是一个很有吸引力的选择，可以简化高通量检测的采样，更适用于POC检测。研究表明，唾液是一种适合多种疾病诊断的样本，包括性传染病，热带传染病和呼吸道传染病。 但是，唾液中存在多种PCR抑制物，且其中的DNA/RNA含量相对于其他类型样本如鼻咽拭子和血液来说通常较低。这对于开发灵敏的诊断检测，尤其是直接检测，是一个很大的挑战。 随着对更易操作、成本更低且反应速度更快的检测要求越来越高，使用原始样本无需DNA或RNA提取的分子检测技术将越来越受欢迎。 结合了无创采集唾液样本和直接检测于一体的方法是新一代筛查检测的理想方案。同时，检测性能不受影响，灵敏度和可靠性要和目前检测方法相似才能达到用户的希望值。 迈迪安最新推出的Specimen-Specific™ 唾液直扩预混液，可以突破在开发唾液直接检测时遇到的挑战，是专门用于对唾液原始样本灵敏可靠的检测优化的配方。 这种即用型的预混液，使用时只需要添加特异性引物和探针即可。此外，它们还可以通过冻干或风干，用于开发常温稳定的检测，是POC检测的理想选择。 唾液分子检测性能测试 为了评估迈迪安唾液直扩预混液的性能，宝创生物进行了一系列检测，将Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）和Air-Dryable™ 可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）与参照试剂进行了性能对比。 这些预混液分别用来对唾液的粗裂解液和提取的核酸样本中的SARS-CoV-2和流感病毒RNA靶标进行扩增。 检测数据显示，迈迪安的唾液直扩预混液具有更优的性能，比通用型预混液有更强的抗抑性，实现更高的检测灵敏度，即使在干燥后常温存放的条件下。 研究1. 检测唾液中的SARS-CoV-2 目标 比较Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）、Air-Dryable™ 可风干一步法 RT-qPCR预混液（MDX095）及对比试剂在多重检测中检测SARS-CoV-2 RNA的性能（FAM：ORF1ab，ROX:N蛋白, Cy5:GAPDH内参）。 新冠患者体内提取的唾液经RNA提取或粗裂解处理样本，取半数组织培养感染剂量（TCID50）为1000拷贝/毫升为模板进行扩增。 方法 从SARS-CoV-2病毒感染患者体内提取的唾液样本经过RNA 提取或简单裂解液处理（50 μL 唾液样本加入 50 μL裂解液后在95°C加热5分钟，经过11,000 rpm 涡旋1分钟取上清液）。 qPCR反应设置：5 μL，4x 预混液（MDX131，MDX095或对比试剂），1 μL引物探针混合物 4 μL DEPC 水及 5 μL提取的RNA模板或粗裂解液。qPCR扩增设置：逆转录 55°C x 10分钟，95°C x 3分钟，（95°C x 10秒，60°Cx45秒，69°Cx20秒）x46个循环。 结果
对提取的RNA和唾液粗裂解液样本的扩增中，Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）的Ct值比Air-Dryable™可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）和对比试剂更提前。 这表明MDX131对唾液中存在的抑制物，包括提取的RNA中残留的抑制物，比其他预混液有更强的耐受能力。无论是直接扩增还是扩增还是提取的RNA，MDX131是超灵敏唾液POC检测的理想选择。 研究2.检测唾液中的Flu B 目标 比较Air-Dryable™ 唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）与Air-Dryable™ 一步法RT-qPCR预混液（MDX095）风干和液体体系对唾液样本中Flu B的扩增。 方法 FluB样本或采用磁珠法提取RNA，或分别使用不同缓冲液处理得到集中粗裂解液样本。然后这些样本快速涡旋娶上清液，用健康的人体唾液将Flu B样本稀释至103或104倍（见表1）。样本通过标准循环或者快速循环进行扩增。
结果
与Air-Dryable™ 可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）相比，Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）在快速和标准循环设置中对所有样本的扩增Ct值都更快。 这说明MDX131对唾液样本中存在的抑制物，包括在提取核酸中残留的抑制物，都具有更强的耐受性能。 总结 这个研究显示通用型抗抑性预混液可以用于唾液样本，但是在反应速度和灵敏度上都不如专门针对唾液样本的预混液。 Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）和Air-Dryable™ 可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）在快速反应条件下性能都优于通用型的抗抑性预混液，但是MDX131对提取的RNA或人体唾液粗裂解液的扩增要比 MDX095更好。 唾液直扩预混液MDX131专门针对唾液样本中特殊存在的抑制物而优化。因为提取核酸中也有少量抑制物残留，而唾液直扩qPCR预混液对这些抑制物具有更强的耐受性能，因此即使对于提取的核酸样本，它也比普通的qPCR预混液具有更高的检测灵敏度。 迈迪安的唾液直扩qPCR预混液是适用于呼吸道病传染病检测的最优选择，助力分子POC开发，其可冻干的优势还能实现常温储运，满足IVD诊断的快、准、精、便的更多需求！ 迈迪安诚邀各位IVD同仁参加10月南昌CACLP展会，莅临我们的展位和卫星会议，了解迈迪安最先进的分子诊断试剂能为您提供的解决方案！
迈迪安的所有产品都可以提供商业大规模生产，符合ISO13485标准，并大量用于全球各种获得认证的商用检测中。 参考资料： 1.https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2019.02234/full 2. https://www.future-science.com/doi/10.2144/000114253 3. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6803449
特别鸣谢：宝创生物 关于迈迪安 Meridian 北京迈迪安生物科技有限公司是Meridian Bioscience在中国设立的全资子公司。
Meridian BioScience （以下简称：迈迪安）是一家全球领先的生物诊断公司，总部设立在美国，距今已有45年的历史。迈迪安公司分为诊断和生命科学两个部分，在中国地区的主营业务是生命科学产品，包括各种分子和免疫诊断检测的关键原料，如抗原抗体、免疫阻断剂、PCR和LAMP反应的聚合酶和优化的预混液、核苷酸等，为人体、动物、农业、环境及食品安全等各种检测提供全面的解决方案。45年来，迈迪安已经成为全球各领域诊断企业的首选原料供应商！
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