分子｜在PCR试验中，该如何处理反应孔的标签错误问题

在这篇文章当中，我们需要解决的是在标记实时PCR软件模板时遇到的常见问题，特别是在当我们在指定技术重复时经常会遇到挑战。对于那些不太熟悉实验的人来说，当我们提到技术重复的时候，指的是包含相同数量、相同样品的反应孔，而且用相同的检测方法扩增。

现在，我们在进行PCR反应的时候，通常以三倍的数量移取我们的样品，当然这个不是硬性的规定要求，因此具有相应的灵活性。

有了多个重复样本，我们就可以在运行结束之后，确认我们移液操作的再现性，而且多次重复也有助于我们识别和省略偶尔出现的离群值，而不是说我们有没有任何离群值。

当运行结束的时候，实时软件会对所有标记为技术重复的孔中特定目标的CTs进行平均。现在问题来了，如果它不知道哪些井是技术重复，那么就无法做到这一点。

下图是一个相当常见的标签问题，大家可以看到，所有的重复都被指定为正确的样本类型，但是呢，在最后都加上了数字1、2和3。

这看起来是一个合乎逻辑的选择，但会导至软件将这三孔认为是三个独立的样本，所以软件并没有去计算平均CT值，而是将它们分开处理。

如果出现了这种情况的话，不要紧张，有一个简单的解决办法可以来处理这个问题，只要回到设置中去。

将不包含数字的样本名称添加进去。

并将这些样本名称分配到正确的孔上。

最后回到分析，重新分析数据

这样，我们马上就能计算出正确的平均CT值了。

我们在操作过程中要注意这一点，实时PCR软件实际上是非常宽容的，比如ABI的软件，它允许你在运行后回到原位，改变特定孔的设置信息，而不是重新分析数据。所以如果出现标签不正确的情况，请不要立刻丢弃运行文件并重新开始实验，而要先考虑是否可以通过修改标签来解决问题。