核酸检测作为新冠肺炎疑似病例的确诊依据，在疫情防控中发挥着至关重要的作用。“内标”基因作为体现核酸检测质量的重要指标之一，能够对采样、提取、扩增等多个环节进行监测，可作为室内质控的有力补充。
目前NMPA批准的所有新冠病毒核酸检测试剂均包含“内标”，可分为“外源性”和“内源性”两种。下面结合实验室常遇到的样本“内标扩增异常”情况，和大家探讨一下在质控满足要求时，如何正确的认识核酸检测中的内标基因。【1】外源性内标
可能原因：无法明确是否存在检验前问题，多数为内标样本错加漏加、核酸加样时错加漏加；若连续多个样本存在此情况，首先考虑提取试剂、提取仪的问题。
常见原因：应先明确靶基因是否同内标基因存在竞争或抑制作用，若不存在，原因同上，且该扩增孔可能存在污染。常见原因：外源性内标最大特点为均匀性好，故个别样本内标离散时多为反应体系中存在抑制物；部分连续样本内标离散时，应首先考虑提取试剂、提取仪的问题；若整板样本内标离散时，多为扩增体系配置时未充分混匀。下图为因磁珠残留、加热模块异常，造成多个连续样本内标基因离散更换试剂、耗材、仪器等条件进行复检；重新采样检测并严格按照SOP操作等。内源性内标有典型扩增曲线并不代表采样成功，原因有：①对于混采样本，只需1个受检者采样成功，内源性内标就会有扩增；②如不能正确采样，仅采集口腔甚至皮肤样本，也会有内源性内标扩增；但需指出的是，采样不成功时，内源性内标一定无扩增。
常见原因：实验室较为常见，涉及范围较广，包括检验前样本采集、保存、运送问题；检验中反应体系、提取、扩增问题以及人员操作问题等。常见原因：此情况极为少见，因内源性内标基因与靶基因通常无竞争或抑制作用，因此原因同上，且该扩增孔可能存在污染或非特异性扩增。
常见原因：由于采样质量直接影响内标扩增结果，故曲线较离散属于正常情况，并不一定是人员不规范操作所引起。
若排除检验前问题，整体内标曲线相对离散，可能由于样本未充分振荡混匀或扩增体系配置时未充分振荡混匀。
更换试剂、耗材、仪器等进行复检；重新采样检测并严格按照SOP操作等。①提取仪异常导至提取效率低，多为加热模块故障、磁珠异常或磁珠残留；③不同采样管内的保存液对提取试剂的提取效率有影响。
常见原因：多为错用扩增程序，如A试剂反应体系使用了B试剂的扩增程序，可重新选择正确的荧光通道。
不同形式的内标各有利弊，目前有证新冠病毒核酸检测试剂既有采用外源性内标的方式，也有采用外源性内标的方式。因此，实验室可根据具体使用需求和应用场景来科学看待并灵活选择。
核酸检测中的每一环节都有可能影响检测结果，如内标曲线出现异常时，应细心分析并明确其原因，以更为有效地保证新冠病毒核酸检测质量，为疫情防控保驾护航。
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