酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。 ELISA实验方法做为常用蛋白检测方法，其与其他wb，ihc，if等不同之处在于，其可以实现蛋白检测的相对绝对定量，具体得出样本中蛋白的浓度，如pg/ml,ng/ml。wb，ihc，if等是蛋白检测的相对定量，比较的是样本与样本之间蛋白量的相对表达差异。
检测样本为均质的液态样本，如血清、血浆、尿液、细胞培育上清或安排匀浆液等，不同类型的检测样本前期的处理办法是不一样的。正确的处理样本是确保ELISA检测的正确性和准确性的关键环节。
常用类型：双抗夹心法，直接法，间接法，竞争法。
双抗夹心法 是针对液态样本广泛而经典的抗原检测方法。
直接法 抗原检测方法，应用较少。
间接法 测定抗体方面，通常所用的方法称为间接法，也是目前较常用的方法。 包被抗原，加入含有待测抗体的样本，再加入酶标抗体（检测抗体），显色后即可测定抗原含量。
竞争法 竞争性ELISA适用于小分子抗原/半抗原测定。 待测抗原与包被抗原竞争性结合酶标抗体，酶标抗原或者其类似物与待测抗原竞争性结合包被抗体。 小分子/半抗原分子很小，往往其实仅有一个表位，不能形成不同位点与抗体结合的夹心之式；即使有的类半抗原多肽可能会存在两个或以上的表位，但抗体制备中的现实是常很难获得针对不同表位可以构成夹心配对使用的抗体，此种情况下，选择构建竞争性ELISA方法则是一个很好的策略。有些分子量足较大、足够复杂的含有多个表位的具完全抗原性的分子，如在仅一株单抗或仅有其多抗可被利用的实际条件下，也需考虑选择设计竞争性的检测方法。 酶标抗原或者是其类似物与待测抗原竞争性结合包被抗体较为常用：
1 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。读数前15分钟打开酶标仪预热。 2. 洗涤液：将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1: 24)。 3. 标准品工作液将标准品于10000×g离心1分钟，稀释标准品，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，轻轻混匀，配成最高浓度的标准品工作液，进行倍比稀释。 4．按照说明书推荐稀释生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。
1. 将标准品工作液依次加入到标准品孔中，待测样品加入其他孔，加入体积与反应时间详见说明书，建议做2-3个平行孔消除操作差异，数值明显差异的可舍弃。 2.洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液，加入体积与反应时间详见说明书。 3. 洗涤 4. 每孔加酶结合物工作液，加入体积与反应时间详见说明书。 5. 洗涤 6.加底物溶液(TMB)，加入体积与反应时间详见英文说明书，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右。 提示：根据实际显**况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。 7. 每孔加终止液 提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。
1 标准品和样品严禁反复冻融，不同样本选择合适的处理方式； 2 样本、标准品设置2-3个平行； 3 样本初次检测建议做梯度稀释比的摸索； 4 空白对照：仅用稀释液代替检测样本,用以观测最终反应的显色"本底",并用于酶标仪消除,扣除"本底"。 5.操作过程中使用密封膜封板； 6.充分洗涤，充分拍板。 7.数据处理时选择合适的回归曲线，如直线回归，多项式回归，四参数回归等。 公司简介： ImmunoWay Biotechnology Company（简称Immunoway）公司成立于2002年，于2012年在美国德克萨斯州注册品牌。 自公司成立一直专注于抗体的研发和生产，抗体种类达18000+，单克隆抗体种类2000+，多克隆抗体15000+，二抗1000+，检测液态样本Elisa试剂盒700+，检测细胞样本Cell-Based Elisa Kits3000+，满足广大科研用户的使用和需求。 公司于2014年投入研发免疫组化专用抗体，国际单克隆抗体著名专家指导研发，免疫原针对免疫组化实验而设计，单克隆细胞株的筛选，抗体的验证均经过千张阳性切片和阴性切片检测，明确组织定位和细胞亚定位，抗体特异性强，灵敏度高，低背景，按照体外诊断试剂备案和注册要求研发生产。临床免疫组化应用于病理的辅助诊断和鉴别诊断，为疾病治疗提供客观的指导方案。目前抗体种类已近200种，覆盖肿瘤病理诊断，如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，胃癌，肝癌，淋巴瘤，前列腺癌，甲状腺癌等所需检测指标的绝大部分。 公司2022年新增基因工程纳米研发生产平台，陆续推出纳米抗体产品，用于治疗性抗体药物、诊断试剂、亲和纯化基质和科学研究等领域。新增流式抗体研发和生产平台，抗体荧光标记等，满足临床和科研用户流式细胞分析实验需求。 Immunoway将不断研发和生产出优质的抗体及相关产品，为临床和广大科研工作者提供更好的工具，共同服务于生命科学。 |
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