胶体金检测卡研发思路和优化！

1、 研发思路

（1）胶体金研发思路主线包括金颗粒的烧制、标记过程、标记后抗体的质量控制。是整个胶体金试剂的重点。目标是将金颗粒的大小降到物理底线，提高标记结合效率增强显色效果。目前普通方法烧制的颗粒是在40nm左右，10nm甚至更低的颗粒烧制已经在一些研究项目中顺利实现。可以实现效果为，胶金呈液体状，无胶状粘稠感，结合效率明显倍数提高，且假阳假阴性降低。涉及到抗体、保护剂、PH、胶金处理方法等等。

（2）数学模型的建立，针对检测中涉及的抗体标记量、盐离子浓度、表面活性物质浓度、保护剂添加量等，建立起相互作用关联性研究。结果采用数理统计的方式，构建数学模型，我曾经考查过相关情况，推荐使用多因素响应面分析方法获得最佳组合。再通过对某几个相似产品的研究，找处该研究方法的数学规律，为具体产品的研究提供指导。

（3）定量分析，抓住某几个成熟产品，在这个基础上寻求定性向定量的提升，可以选择的方法是多条线浓度梯度、加入磁珠或荧光物质进行检测等。

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2、准备工作

1）人员

胶体金的基本原理是免疫反应，所以最好是具备一定的免疫学基础。在研究过程中，最好是以前做过酶标等免疫学实验，这样进展速度会快一点，学历到是次要的。最理想的效果是形成一个研究小组TEAM，在4人左右，分工上一人做上游原料的优化和标记，两人做下游的优化，一人做总的协调和最优条件的搭配组合。

研发中，人员配置非常重要，直接关系研发时间、费用、结果。最有效的人员配置方法就是挖人，从大的试纸生产公司挖相关的技术人员，构成骨干力量。大企业的从业人员会有比较好的工作流程带过来，能快速构建强大研发平台。但各大公司的文化不同，所以来源单一较好，应避免出现不同文化冲突出现在你的公司。按照流程来安排人员，工作流程不能中断，要构建流水线式的研究结构。

2）材料

需要提前准备的材料是抗原抗体等生物性原料，例如打老鼠备腹水要三个月左右。来源一般有二。

（１）自己做抗体，时间久，效果有待考察，不确定因素多。但成本低廉。

（２） 购买成品抗体，价格贵，但质量好。

建议在研究初期，购买一定量的优质抗体进入研究流程，同时抓紧时间研究自产抗体，当自产抗体达到一定水平时候，我们就可做替换，同时进入工业流程。而又不耽误研究的进行。

膜，现在有三家，WHATMAN AND S&S，MILLIPORE，SARTORIUS.现在前两家比较好买。质量都不错，当大批量生产时我倾向于80%使用第一家，因为价格便宜，少量产品使用第二家，方便控制成本。

其他耗才，研究时尽量使用进口货，质量稳定加快研究进度，生产时寻找合适的国产货物来代替，降低成本，代换时，采用独个代替法。

3）仪器

仪器购买方面就看大家的经济实力了，同时看长远的打算。个人推荐BIODOT，如果做以后的定量研究那更是只有BIODOT能做到。如果暂时没有仪器只能用EPPENDOF微量移液枪来点了。

4） 费用

耗才的主要费用在膜上，如果抗体自己做。还有就是一个机器的费用。预算方面，机器喷切一起在50多万人民币左右，如用于生产，效率约在14万-21万人份左右/8小时。耗才就要看你的具体实验而言了。

3、过程控制

过程控制是研究工作的关键，有许多的研究者忙忙碌碌大半年也没有出什么结果，方向是对的，也花了很大的功夫，可是却老是在走弯路。所以在研究过程中要注意大方向的把握和时间进度的控制，deadline是一定要制定。

1）方向与工作力量搭配

首先，控制原料来源为这个研究工作中的重点

有许多研究人员喜欢每次都做小批量，到第二次想重复实验时就出现无原料，实验重复不出，且老是换化学药品的厂家、批号，结果也同样导至实验无法重复。所以，我们要控制各项原料的来源问题，例如抗体，膜的厂家和生产批号，各化学药品的批号。有些原料（如：抗体）的消耗量比较大，不可能一个批号用之不竭。所以要在这里建立一个原料评估流程，对新来的原料要以老原料为标准进行评估。

同时对于下一个流程，上一流程供应的半成品或成品也相当于原料，同样应该进行评估。尤其是标记后的抗体要经过测吸光，测实际效价才能有效保证后期效果的一致条件下比较。

这个制度有利于多方合作中的有效衔接。

评估需要一个平台。这个平台是整个实验的重要环节。

其次，构建实验基本模型平台

所有原材料只有在一个具有雏形的平台上才能进行搭配组合，这里涉及到一个实验模型的建立。例如，我在进行研究时，习惯先建立一个最基本的因素条件，膜用18或者25mm，抗体喷量，标记量，两根线的喷点位置等等都先确定下来，后来就在这个基础上每次改变一个或一关联组条件来进行调整，最后将最优的条件进行合适的调试组合。前期的单条件优化可以得到一些规律，后期在这个基础上做有方向性的优化。

最后，项目向产品化转换，TRANSFOR.这个过程中要注意验证实验的准确性、精确性。

在以上这些过程中调试组合将是时间最长、精力消耗最大的部分。很多研究者都是陷在了这个地方，而当分析起问题来才发现每次都有药品更换，又未建立起评估机制，分析原因非常困难。

2） 时间

快诊优点就是一个“快”，研究也一样。一、两年都出不了产品，后期就没有太大价值。Deadline要在实验开始前就要制定，什么时间到达什么程度，将遇到什么问题，提前采取了哪些预防措施，遇到困难后怎么克服。都有一个明确而且详细的规划，才能保证后期产品的成功。

避免上下流程中的推委，遇到有些研究者也有分工合作，可是往往遇到做抗体的不管条出的情况，做条的不管原料的合格与否，来一批做一批，不合格就死调，最后还是没结果。在这里需要建立一个项目组，组有个共同的deadline，每个流程有具体的deadline，每项实验有确定的deadline.每周TEAM都找个时间出半小时集体交流一下工作情况，反映问题，调整方向。这样实验才可能顺利的完成。

4、试剂优化

1）抗原或者抗体的制备，使用的不同方法之间的差异。关键在条件优化，较容易更改的条件是抗体的提纯。

2）不同型号膜，耗才的筛选。这里可以有多个公司，不同型号膜在该产品的应用比较。比爬速和灵敏度两个条件。

3）标记，标记过程涉及了多个条件，抗体与金的比例为主，烧金的方法差异比较（有很多人反映微波炉和电炉烧出来的金会有差异），保护剂的加入量。如果研究更深入，可以谈到标记微观藕连的一些位点问题，提出改善标记效果的方向，再结合该方向进行改善性探索。或者进行生物素亲和素配对的标记方式研究，将灵敏度提高百倍以上，当然单这个研究一项都可以发IVD了，难度有点大了。

4）T LINE原料的优化，提高结合比。也可以做溶液中添加物的研究，不同的添加物可以分别起到消除假阳，提高溶液稳定性，提高灵敏度等作用。其在膜上的喷点量也是很有讲究的。不同的量，不同的喷点方式也会造成结果的差异。

5）已标记抗体和T线生物活性物质的结合比例，其实这个实验是贯穿整个研究工作的始终。但结合比还是可以做适当优化的。

6）封闭，可以做膜上封闭和流动封闭两种，封闭本身是修补性质的，只有当系统有问题的的时候才做这个工作。用来封闭的物质很多，但多用大分子蛋白。

7）C线的探索性研究，很多人认为C线是很简单的事情，其实很多的功能等待你去开发，象目前变色C 线，对比C线的功能就很有玩头。

8）样品垫的优化。可以调的东西太多了，而且是立竿见影。具体就不多说了。都是配方。

9）成品条的防潮设计，我看过几个产品设计上吸水设计堪称一流，多注意国外大厂产品设计的方法

10）成品验证实验（至少需两个月）

包括大约十个实验，特异性、线性灵敏度、老化、干扰、批间批内等等。有FDA的PROTOCOL可以参考。