笔者有幸参加省疫情防控督导工作，在日常督导中发现有些分子生物学实验室对新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测存在模糊不清的问题，结合自己的工作经验，参考有关文献做以下简要说明，希望对大家有所帮助。（仅供参考，不对之处敬请谅解）。 为什么要进行性能验证？ 定性试验性能验证要做哪些内容？ 在哪些情况下需要进行性能验证？ 检测系统实验室性能验证方案？
能验证要做那些内容？ 一、为什么要进行性能验证？
保证日常检验结果的一致性和可比性；判断检测结果的可靠性；评价厂商的声明；为选择新方法提供依据。
二、定性试验性能验证要做哪些内容？
根据《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册》（试行第二版）中指出在用于临床标本检测前，实验室应对由提取试剂、提取仪、扩增试剂、扩增仪等组成检测系统进行必要的性能验证，性能指标包括但不限于精密度（至少要有重复性）和最低检测限。CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》中PCR 定性检测选择验证的性能指标宜包括方法符合率、检出限、抗干 扰能力、交叉反应等。实时荧光定量PCR检测新冠核酸病毒一般需要验证符合率、检出限和精密度。
三、在哪些情况下需要进行性能验证？
1. 检验程序常规应用前 2. 任何严重影响检测系统分析性能的情况发生后，应在检测系统重新启用前对受影响的性能进行部分性能验证。现用检测系统的任一要素（仪器、试剂、校准品等）变更，如试剂升级、仪器更新、校准品溯源性改变等应按照新系统来进行验证. 3. 常规使用期间，实验室可基于分析系统的稳定性，利用日常工作产生的检验和质控数据，定期对检验程序的分析性能进行评审，应能满足检验结果预期用途的要求。
四、新冠核酸检测系统实验室性能验证方案
分子诊断检验程序的性能参数主要包括 PCR 定性和定量检测、Sanger 测序、二代基因测序(NGS)和原位杂交等。 PCR 定量检测选择验证的性能指标宜包括测量正确度、测量精密度（含测量重复性和测量中间精密度）、测量不确定度、分析特异性（含抗干扰能力）、分析灵敏度、检出限和定量限、线性区间（可报告区间）等。PCR 定性检测选择验证的性能指标宜包括方法符合率、检出限、抗干扰能力、交叉反应等。 Sanger 测序和 NGS 选择验证的性能指标宜包括方法符合率和检出限等。原位杂交技术应依据样本类型和预期用途，选用适宜的性能指标进行验证，如基于完整细胞的原位杂交宜选用分析敏感性和特异性，基于组织的宜选用方法符合率。 参照CNAS-GL039：2019《分子诊断检验程序性能验证指南》和CNAS-GL037：2019《临床化学定量检验程序性能验证指南》来制定验证方案。
1. 样本准备 样本最好来自患者真实样本，尽量与厂家建立性能指标时所用材料一致。当一份样本需进行多次试验时，对样本进行分装保存，避免反复冻融。因新型冠状病毒不易获得，可以使用三方质控品，经过稀释后获得不同浓度的样本。检测限验证需要定值标准物质（如：国际参考品、国家参考品、厂家参考品）。
2. 符合率的验证
验证方案：选择标本阴性标本至少5例，阳性标本不少于10例（应含有弱阳性标本）。 验证要求：相关符合率不低于说明书声明。 阴性标本：5例正常人鼻咽拭子标本N1 N2 N3 N4 N5 阳性标本：可使用国家卫健委或省临检中心下发的室间质控品、实验室内使用的三方质控品
符合率计算及结论
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浙公网安备33010802005999号
