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核酸提取方法—磁珠法

2021-7-3 22:28| 编辑: 小桔灯网| 查看: 2604| 评论: 0|来源: MLS and IVD丨作者:王逊

摘要: 核酸是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,获得高质量的核酸是开展分子生物学研究的重要前提。核酸提取方法有传统的核酸提取方法、基于二氧化硅吸附提取法、磁珠吸附提取核酸法,目前应用最广泛的是磁珠法。生 ...

核酸是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,获得高质量的核酸是开展分子生物学研究的重要前提。核酸提取方法有传统的核酸提取方法、基于二氧化硅吸附提取法、磁珠吸附提取核酸法,目前应用最广泛的是磁珠法。

生物磁珠简介

生物磁珠是指具有细小粒径的超顺磁珠微球。一般情况下,磁珠具有超强的顺磁性,在磁场中能迅速团聚,离开磁场后又能均匀地散开。用于生化研究方面的磁珠具有丰富的表面活性基团;通过对磁珠进行特定的包被(如羟基、羧基、氨基等活性基团)以便与生化物质偶联,并在外磁场的作用下实现与被待测样品的分离。与传统的分离方法相比,使用磁珠对生化样品特定组分的分离,能够实现高通量和特异性的分离和富集,有效地提高了分离和富集的效率,同时大大提升了分析检测的灵敏度。

磁珠法核酸提取纯化原理

磁珠法核酸提取纯化原理运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰,对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰,通过高活性的表面活性基团与核酸分子特异性识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在变性剂(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外磁场的作用下,能从血液、组织、食品、病原微生物等样本中分离核酸,可应用于临床疾病诊断、法医学鉴定、输血安全、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。

磁珠法核酸提取过程

核酸与磁珠的结合主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被释放出来。此时经过表面修饰的超顺磁性氧化硅纳米磁珠即与核酸进行特异性结合,形成核酸一磁珠复合物。然后在外磁场的作用下,复合物分离出来。经过洗涤液去除非特异性吸附的杂质,最后使用特异洗脱液解离吸附于磁珠表面的核酸,得到提取的目标核酸物质

磁珠法核酸提取的优越性

当前随着基因检测、个性化用药、产前诊断等技术的普及,在生物行业各领域均追求高通量、自动化的快速模式,传统DNA提取方法的局限性越来越明显,而磁珠法DNA提取的优势性则越来越明显;磁珠法DNA提取能够实现自动化、高通量操作,操作简单、耗时短,不使用传统方法中的苯、酚类、氯仿等有毒试剂,安全无毒完全符合现代环保理念;与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。
传统核酸提取法与磁珠法核酸提取法的比较
传统核酸提取法
磁珠核酸提取法
手工提取
实现全自动化模式
技术难度小
高通量、高质量、高产量
技术繁琐
避免了繁琐的人工提取程序
不适合大量样本的提取
减少酚类、氯仿、苯类有机物质对操作人员的危害
不适合临床分子诊断
极大满足了当今市场对核酸提取效率的要求

磁珠法核酸提取的应用范围

磁珠法核酸提取试剂盒是基于纳米技术、分子生物学技术、生物医学技术和法医学技术的综合高科技产品。可广泛应用于分子生物学中的基因组学研究、分子进化学研究、医学中遗传病的研究、突变基因的检测、肿瘤的筛查、产前诊断、HPV等的检测,法医学生物样本血斑、精斑、头发、烟蒂等现场证物的检测,司法上的亲子鉴定、血缘关系的鉴定等提供证据的许多领域。


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