洗洗更健康，一句深入人心的口号。同时，也是免疫诊断试剂的一大工具。

以ELISA为例

1. 固相抗体与抗原反应

2. 清洗、清洗、清洗

3. 与酶标记抗体反应

4. 清洗、清洗、清洗

5. 加入底物

如果没有清洗步骤，检测过程要缩短一大半时间。但是清洗可以提高特异性，消除Hook效应。真是让人又爱又恨。即想要他的好，又不想他占用时间，最好召之即来，挥之即去。

行吗？有吗？可以吗？来，看一看 No Wash的免疫检测！

新闻

Finnish Researchers Leveraging Fluorescence to Develop Fast, High-Volume SARS-CoV-2 Antigen Test

芬兰研究人员利用荧光开发快速、高通量 SARS-CoV-2 抗原测试

赫尔辛基大学的研究人员正在开发一项技术，可以使用一台计算机大小的仪器在一小时内测试多达 500 个样本。

该小组已经验证了这种抗原测试，该测试利用时间分辨荧光共振能量转移（ time-resolved fluorescence resonance energy transfer， TR-FRET），涉及两个光敏分子或荧光团之间的能量转移。

当荧光团非常接近时，在相距约 1 到 5 纳米的时候，它们之间会发生能量转移 。荧光共振能量转移也称为福斯特共振能量转移。由此产生的 TR-FRET 信号变化可以通过测定进行测量。该测试系统使用紫外光进行荧光激发，并在时间延迟后测量发射信号，去除样品中生物物质的背景噪声。

赫尔辛基大学的 TR-FRET 检测使用供体和受体标记的多克隆兔抗体，这些抗体可以与 SARS-CoV-2 核蛋白和刺突蛋白结合。当样本呈阳性时，标记了供体荧光团的多克隆抗体会靠近标记了受体荧光团的多克隆抗体，两种版本的抗体都与样本中的 SARS-CoV-2 核蛋白或刺突蛋白结合。

灵敏度：97.4% (37/38) ，参照PCR 

特异性：100% (10/10) ，参照PCR 

如果可以开发出 SARS-CoV-2 商业测试并将其推向市场，则可以以 5,000 美元或更低的价格提供实验室仪器，“试剂成本将在每次反应 10 美分的范围内。”

原理

当供体和受体的荧光团接近时，荧光共振发生，受激供体将能量转移给受体，然后受体发出波长不同的光子。供体和受体越接近，能量转移越频繁，通常在15 ~ 60 Å的距离可达到50%的效率。

点评：

只要两个抗体靠的足够近，荧光共振能量传递就会发生，紫外光源激发供体，供体把能量传递给受体，受体发射荧光。

这个方法的一个关键点就是相距约 1 到 5 纳米，如果抗原比较大，然后抗原表位分得比较开，就不好用了。

标记镧系元素的说明

We labeled the affinity-purified antibodies, at 250 μg/reaction, with the donor (europium [Eu]) and acceptor (Alexa Fluor 647 [AF647]) using a QuickAllAssay Eu-chelated protein labeling kit (BN Products and Services Oy) and Alexa Fluor 647 NHS (N-hydroxysuccinimide) ester (Thermo Scientific) according to the manufacturer’s instructions. A disposable PD-10 desalting column with Sephadex G-25 resin (Cytiva) served to remove nonreacted fluorophores, and an Amicon Ultra 0.5-ml 50-kDa-NMWL centrifugal filter (Millipore/Merck) was used for concentrating the labeled antibodies, which were then stored aliquoted at −80°C until use.

PDF论文：用于抗原检测的通用、可扩展和快速时间分辨 Förster 共振能量转移测定法——SARS-CoV-2  

https://journals.asm.org/doi/full/10.1128/mBio.00902-21