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血液细胞,流式细胞分析及免疫组化试剂的研制

2020-5-22 09:57| 编辑: 班木芙兰| 查看: 7288| 评论: 0|来源: 体外诊断那些事

摘要: 血液细胞分析试剂研发血液常规想必是大家很熟悉的临床检测项目了,传统的检查方法是人工借助显微镜,对血液中的红细胞,白细胞,血小板进行计数和白细胞分类,费时费力。随着血液细胞分析技术的发展,自动化设备也应 ...
血液细胞分析试剂研发

血液常规想必是大家很熟悉的临床检测项目了,传统的检查方法是人工借助显微镜,对血液中的红细胞,白细胞,血小板进行计数和白细胞分类,费时费力。随着血液细胞分析技术的发展,自动化设备也应运而生,操作简单,准确性高,可以快速出具检测报告。
那么血液细胞分析相匹配的试剂主要包括稀释液,溶血剂,染色液及清洁液等。下表列了各成分的用途:


血液细胞技术采用的是电阻抗原理,即库尔特原理,当一个不良导体颗粒,通过两个电极之间时,导至电路的电阻抗发生变化。血液细胞为不良导体,当一个细胞通过计数小孔时,会导至小孔两端电阻的变化,将其转化为脉冲,感应器通过检测脉冲的数量及大小,从而计算出通过小孔的细胞数量及体积。脉冲的数量代表细胞的数量,脉冲的大小代表细胞的体积大小,还可以通过特定的直方图,显示出特定细胞群的平均细胞体积,细胞分布情况和是否存在明显的异常细胞群。

血红蛋白的检测通过溶血剂快速破坏红细胞,同时将一定比例的血红蛋白转换为稳定的血红蛋白衍生物,其吸光度与样品的血红蛋白浓度成正比,通过测定吸光值,根据郎伯-比尔定律即可得出血红蛋白浓度。

血液细胞联合检测技术是以流式细胞技术为基础,将流式,射频,鞘流,激光,电导,电阻抗,细胞化学染色等多项技术联合对白细胞分类测定。这里面涉及到鞘流技术,待测血液样本在气体的压力下进入流动室。流动室内充满鞘液,鞘液用以裹携细胞,经由流动室喷嘴流出时形成单一的细胞液柱,液柱与入射激光束在测量区垂直相交,这就是所谓的鞘流技术。


流式细胞分析试剂研制

流式细胞分析技术基于流式细胞仪FCM进行的,是一种用于检测液体中悬浮颗粒特定理化特性如大小,结构,核酸蛋白等分子种类及含量的仪器,集合了单克隆抗体,荧光化学,激光,光电检测,嵌入式系统,计算机技术,流体力学等多个领域技术。在实际操作中,待测样本经过处理后,其颗粒上携带有多种特异性结合的荧光染料。检测时,样本中的颗粒会在仪器液流系统的作用下直线排列于流道的中心,并逐个高速通过仪器的检测区域。流式细胞仪按照功能分为分析型和分选型。


免疫组化试剂研制

免疫组织化学(IHC)技术,是免疫学和组织化学相结合的一项技术,根据抗原抗体结合反应的原理,利用抗体特异性识别组织或细胞中的目标抗原,再应用酶标二抗或荧光二抗靶向结合抗体,使组织或细胞中的目标抗原得以显现,然后借助光学显微镜观察,结合照相系统成像,实现对目标抗原定性、定位和定量的检测技术。


免疫组化是一种原位检测方法,主要应用于冷冻组织和福尔马林固定-石蜡包埋组织。免疫组化技术步骤繁多,包括标本前期处理,烤片,脱蜡,抗原修复,抗体孵育,检测放大系统孵育,显色试剂染色,复染等。特异性抗体(一抗)是免疫组化技术的核心试剂,抗体质量在免疫组化染色中起至关重要的作用。检测放大系统和显色试剂是免疫组化技术的重要试剂,修复液,缓冲液,封闭剂,抗体稀释液,复染液和封片剂等则是免疫组化技术必不可少的辅助试剂。


此外在分子诊断中也介绍过荧光原位杂交(FISH)技术,IHC和FISH是临床病理诊断过程中的两种重要辅助手段。这两种分别是蛋白和核酸水平的检测方法,各有优势和互补,已经广泛用于日常病理诊断过程中,极大地提高了病理诊断的准确性和可靠性,可以指导临床治疗,同时IHC和FISH也是相关生物医学科学研究的常用技术。随着新蛋白和核酸分子标记技术的不断发现,未来免疫组化和FISH检测技术在临床病理诊断和医学科学研究中的应用范围将更大。


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