在临床核酸检测中，采样→保存送样→病毒灭活→裂解核酸提取→检测，是一个连贯的受控过程，其中任何一个环节出现问题，就有可能导至检测结果出现假阴性的情况。因此全流程严格质控才能保证检测结果的有效性。前天和大家分享了样本采集送检方面的内容，今天为您带来RT-PCR检测质控部分的内容。 新型冠状病毒检测实验室需要满足哪些条件？ 1）需要具备生物安全二级实验室和《临床基因扩增检验实验室》资质； 2）实验室要进行合理的分区，避免交叉污染，通常包括试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区； 3）检测人员要采用生物安全三级实验室的个人防护。
样本灭活后对新型冠状病毒的检出有影响吗？ 文献及指南报道，烤箱或者恒温箱56℃ 30 min的灭活方式，不影响呼吸道样本中RNA病毒的检测，且可降低新冠病毒核酸检测实验室工作人员被感染的风险。
离心柱提取核酸和磁珠自动提取核酸各有什么特点？ 当下主流的核酸提取纯化方法有：硅胶柱离心法和磁珠法。离心柱法核酸回收效率、纯度相对较好，而磁珠法可满足大量样本的自动化操作。可根据检测样本量和实验室条件灵活选用核酸提取方式。
图.自动化核酸提取仪
RT-PCR检测过程中的内标是什么？有什么作用？ 一般选择的内标基因为人的β-actin、GAPDH或者RNase P。通过内标可以监测是否采到足够量的细胞，对提取和扩增也能起到一定质控作用。
图A.β-actin；图B.GAPDH；图C.RNase P
RT-PCR检测过程中的阳性对照是什么？有什么作用？ 选用新型冠状病毒靶基因的假病毒作为阳性对照，可以模拟样本中病毒核酸的原始状态，能够准确监控提取、逆转录、荧光扩增检测全流程。 新型冠状病毒为RNA病毒，由于RNA假病毒制备困难，很多试剂盒的阳性参考品采用构建的质粒DNA或者PCR扩增产物来替代，但是DNA不参与提取和逆转录的过程控制，所以不能起到严格意义上的阳性对照。 （注：假病毒是核酸片段与包装蛋白形成的复合体）
作者：谢俊 编辑：赵晓晶 校审：孙经梦 ------ END ------ |
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