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杂谈丨新冠状病毒的免疫学检测

2020-2-9 00:57| 编辑: 小桔灯网| 查看: 3354| 评论: 1|来源: 小桔灯网 丨作者:Numbrg

摘要: 最近有很多公司发布测新冠病毒的试纸条,疫情肆虐的背景下,这是个大热点,作为一个有点经验的技术民工,结合自己的研发经验来点冷思考。 传染病的免疫学检测一般有两种方式:_一种是用抗体测抗原,这是找直接证据, ...

最近有很多公司发布测新冠病毒的试纸条,疫情肆虐的背景下,这是个大热点,作为一个有点经验的技术民工,结合自己的研发经验来点冷思考。

  传染病的免疫学检测一般有两种方式:

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一种是用抗体测抗原,这是找直接证据,测出抗原肯定是有感染了;另一种是用抗原(一般是重组的)测抗体,这是间接证据,人有了这个抗体,又不是通过打疫苗获得的,就间接证明感染了这个病原体,测抗体又分两种模式,一是用双抗原夹心测抗体,另外一个是用抗原和抗人抗体做间接法(好处是可以区分IgM和IgG,也就是可以在早期确定是否为现症感染)。

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病毒结构图


免疫学是检测冠状病毒的蛋白靶点,从结构图上可以看到病毒有几个蛋白,一是刺突糖蛋白S,这个是病毒感染人体细胞的武器,SARS和新冠病毒都是通过这个S结合呼吸道上皮细胞的ACE2蛋白,从而侵入肺组织,导至肺炎,S一般也是疫苗研究的靶点。二是膜蛋白M和包膜蛋白E,这两个组成病毒的外壳,含量丰富。三是核蛋白N,核蛋白一般是种属特异的,这个通常作为检测的靶点,而表面的S蛋白和膜蛋白特异性会低一些,就好比外套一样,可能跟其他病毒撞衫,另外表面抗原在病毒外壳上会有很多重复序列,导至抗原抗体形成空间聚合物,这有利于凝集实验,但对我们层析产品来说,却是个噩梦。


对于新冠病毒来说,由于刚开始研究,一般很难快速制备抗体,所以目前号称检测新冠病毒抗原的产品,多半是用之前研究其他冠状病毒时的抗体来检测,比如新冠和SARS的同源性很高,我们可以用SARS的抗体临时救急用一下,但是特异性和灵敏度能做到什么程度,只能看脸。抗原一般测咽拭子,因为病毒在这里比较多。


而基因工程比较成熟,我们最早能够得到的是重组抗原,重组的也是那几个靶点蛋白,所以间接法测IgM和IgG是疫病初期最容易实现的检测模式。重组抗原是利用一段基因表达出特定的蛋白,不用担心传染性的问题,病毒之所以传染是因为他有完整的结构(蛋白质加遗传物质RNA),所以把重组抗原看成鸡蛋就行了,他只是一堆蛋白质而已。如图所示,标记重组抗原,膜上分别包被抗人IgM和抗人IgG,测试血液样本,因为人的抗体在血里。


产品图片


但是用重组抗原检测抗体也有很多的问题,首先你的重组抗原选择的是MSN的哪里?是哪段片段?其表达出的蛋白和天然抗原的结构是否完全一样?另外不同人对病毒的免疫应答也存在差异,所以用重组抗原测抗体的灵敏度和特异性是很头疼的问题,不同片段的重组抗原甚至一个片段的重组抗原的不同的表达和纯化方法都会对最终试剂的性能产生很大影响,有时识别IgG的抗原可能与IgM结合较差,另外试纸条的工艺也对IgG和IgM的检出有很大影响。


所以测抗体不像测抗原,抗原你测培养液都能看出产品性能,但是测抗体,不大量测实际样本,做出来什么鬼都不知道,放到临床上一边假阳一边假阴,算命先生都分析不出结果来,这也是目前制约企业研发的一个关键点,血液样本国家禁止买卖,所以目前很多厂家都宣称和某某研究院合作开发,一是拉人站台,二是没有关系你拿不到样本,当然有关系也不一定能拿到样本,但确实是一个很好的宣传噱头。不知道国家什么时候能考虑一下企业的现实需求,毕竟很多公司把产品质量当做追求,而不仅仅是口号的。


目前还是用PCR结果作为诊断标准,但是PCR试剂的质量和气溶胶污染的问题也很关键。其实像很多医生说的,CT片子也应该可以作为确诊病例的标准了,对于潜伏期的人来说,PCR确实能提前筛出来,免疫学测抗体也会有点用,其实CT也好,PCR也好,免疫检测也好,都是作为辅助诊断的工具,对于湖北那些等不到PCR试剂的,肺部已经明显病变而不能收治的病人,PCR只是一个通行证而已,当然湖北方面也知道,所以新建了两个医院专门收治病人,希望疫情早点结束吧。

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最新评论

引用 Wyx 2020-2-11 12:59
我想问一下这种试纸条控制线包被的什么呢?

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