蛋白质是生命功能的最终执行者,也是临床诊断、疾病分型、药物筛选等生物医学相关领域重要、应用广的检测对象。免疫检测一直以来在蛋白质检测中占据着主导地位。免疫检测技术如ELISA,CLIA等的灵敏度一般只能达到pg/mL水平。然而,在疾病早期,精确检测这些超低丰度蛋白又对预判疾病的发生与转归有着重大意义,伴随着大健康产业和精准医学的发展,传统方法的技术瓶颈与巨大市场需求之间的矛盾日趋凸显。本期推送主要介绍Digital ELISA的技术原理及产业化情况。
Digital PCR是目前绝对定量PCR的主要技术方式,通过对样品的微滴化处理,使每个单元包含没有、一个或者多个拷贝的目标分子,在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增,扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。由于不需要对其扩增曲线进行监控,不受扩增效率影响,扩增结束后通过直接计数或泊松分布公式来计算每个反应单元的平均浓度达到绝对定量的目的。
同样的理念目前已用于开发其它数字化检测技术,如Digital ELISA、Digital LAMP和Digital RPA。为了实现更低浓度蛋白质检测,Quanterix采用类似于Digital PCR的方式开发了Digital ELISA。它们称这个技术为Simoa(Single-molecule Array),Simoa技术灵敏度比ELISA高1000倍以上,它的出现将蛋白质检测技术直接带入到单分子、数字化检测时代,成为fg级超低丰度蛋白质检测领域的优势技术。
什么是Digital ELISA
Digital ELISA,也称为Simoa技术,与传统免疫试验主要区别在于Simoa能够在飞升大小的孔中捕获单个分子,允许单个磁珠信号的数字化读取。Simoa最早的报道源自于2010