按照化学发光反应参与的免疫测定,分为以下四种类型:
化学发光酶免疫测定(CLEIA)是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大,具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶,发光底物为dioxetane磷酸酯,固相载体为磁性微粒。 化学发光免疫测定(CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物,在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。 用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件: 1.能参与化学发光反应。 2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。 3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。 4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。 鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。
代表企业:长光华医、亚辉龙
该免疫分析技术有两种方法:一是小分子抗原物质的测定采用竞争法;二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。 该仪器所用固相磁粉颗粒极微小,其直径仅1.0μm,这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量,使反应速度加快,也使清洗和分离更简便。其反应基本过程:(1)竞争反应:用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与抗体结合成复合物;二是测定抗原与抗体的结合形式。(2)双抗体夹心法:标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。
代表企业:安图、博奥塞斯
电化学发光免疫测定(ECLI)是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应,包括电化学和化学发光两个部分。分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺(NHS)酯,可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合,制成标记的抗体或抗原。ECLI的测定模式与ELISA相似。其基本原理是发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂,将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌,随即释放光子而恢复为基态的发光底物。这一过程在电极表面周而复始地进行,不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。
代表企业:普门、联众泰克
这4种各有优缺点,无论采用哪一种化学发光的原理,核心原料的筛选、抗干扰因素的排除、最大限度消除钩状效应、降低仪器故障率、提升生产工艺、管理水平及技术服务意识等等才是根本之根本。
国内在化学发光技术领域虽然起步较晚,但是随着技术的兴起,资本的流入,目前发展极为快速。 将国内化学发光代表厂家按发光类型分类,结果如下: 图片来源:IVD行业的硬菜
虽然国内磁微粒化学发光免疫检测起步较晚,尚未有厂家能够对4大家构成直接威胁,但是经过10多年的发展,已经取得了一定的技术突破。以郑州安图、四川迈克、深圳迈瑞、亚辉龙、新产业为代表的企业依然不断加大在这方面的投入。
笔者相信,未来5年,10年,国产磁微粒化学发光,以及其他先进检测技术,一定能够取得一席之地,并能够走向国际。
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